Un recente sviluppo di particelle romanzo agglutinazione (PA) test utilizzando molecola recettore del virus ha permesso l'identificazione rapida e facile dei poliovirus (PV). In questo articolo mostreremo la procedura per il saggio PA per l'identificazione fotovoltaico.
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Articolo metodologico
Metodo di particelle agglutinazione per l'identificazione Poliovirus
In questo articolo
Sommario
Abstract
Nel Global Polio Eradication Initiative, diagnosi di laboratorio svolge un ruolo critico, isolando e identificando PV dai campioni di feci di paralisi flaccida acuta (AFP) casi. Nel Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) Global Polio Laboratory Network, PV isolamento e l'identificazione sono attualmente in corso, utilizzando la cultura sistema di celle e real-time RT-PCR, rispettivamente. Nell'era post-eradicazione era del fotovoltaico, procedure di identificazione semplice e rapida sarebbe utile per una rapida conferma di casi di polio presso i laboratori nazionali. Nel presente studio, mostreremo la procedura di test romanzo PA sviluppato per l'identificazione fotovoltaico. Questo test PA utilizza l'interazione del recettore PV (PVR) e virione molecola che è specifica affinità e uniforme a tutti i sierotipi del fotovoltaico. La procedura è semplice (una procedura passo in lastre di reazione) e rapido (risultati possono essere ottenuti entro 2 h di reazione), e il risultato è visivamente osservato (osservazione di agglutinazione di particelle di gelatina).
Protocollo
1. Preparazione del terreno di mantenimento (MM) e una crescita media (GM)
Per la preparazione di MM e GM, consultare un manuale Polio laboratorio dell'OMS 1. Medio Dulbecco modificato Eagle (DMEM) arricchito con il 2% di siero fetale bovino (FCS) e il 10% di FCS potrebbero essere utilizzati come sostituti di MM e GM, rispettivamente.
2. Preparazione di anticorpi anti-PV
- Ricostituire anticorpi anti-PV (PV RIVM digitando antisiero) con l'aggiunta di acqua (0,5 ml per flaconcino) per ogni flaconcino di anticorpi anti-PV (tipo 1, 2 o 3). Aggiungi questo anticorpo soluzioni ricostituite (0,5 ml....
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Discussione
L'unico punto di questo test PA è l'utilizzo della molecola PVR invece di anticorpi anti-PV per il rilevamento di PV 2. Questo consente una specifica interazione delle particelle di gelatina sensibilizzata con PV con una affinità uniforme per tutti e tre i sierotipi di PV 3-6. Abbiamo usato una forma immunoadhesin di PVR (PVR-IgG2a) per la sensibilizzazione delle particelle di gelatina, in quanto forme monomeriche di PVR hanno solo affinità moderata al singolo sito vincolanti per le virione (costante .......
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Dichiarazioni
Souji Masujima è un dipendente di New Product Design Department, Fujirebio Inc.
Ringraziamenti
Siamo grati a Junko Wada per la sua eccellente assistenza tecnica. Siamo grati al Prof. Akio Nomoto per la gentile fornendo un vettore di espressione baculovirus per PVR-IgG2a. Questo studio è stato sostenuto in parte da sovvenzioni-in-Aid per la promozione della eradicazione della polio e della Ricerca sulle emergenti e riemergenti Malattie Infettive del Ministero della Salute, del Lavoro e del Welfare.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
| Gelatina sensibilizzata-particelle | Fujirebio Inc. | Kit per il test | |
| Ricostituzione del buffer | Fujirebio Inc. | Kit per il test | |
| Piastra di microtitolazione | Fujirebio Inc. | Kit per il test | |
| Anticorpi anti-PV | RIVM |
Riferimenti
- World Health Organization. Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , 4th Edition, World Health Organization. (2004).
- Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. ....
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Ristampe e permessi
