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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Analisi dell'impronta
- Allestimento della pista (Figura 1A)
- Taglia un foglio di carta bianca (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm) longitudinalmente in tre lunghezze di uguale larghezza. Metti un foglio di carta bianca (9,9 cm x 42 cm) sul tavolo.
- Metti la scatola della porta scura all'estremità distale della carta. Metti altre scatole (all'incirca della stessa lunghezza di quella della carta) con le pareti su entrambi i lati della pista, impedendo la fuga dei topi.
- Mettere l'inchiostro nero e l'inchiostro rosso in piastre di Petri separate (35 mm di diametro).
2. Sessione di formazione
NOTA: Esegui la sessione di allenamento solo a 4 settimane di età.
- Metti un mouse sull'estremità prossimale del foglio (rivolgi la testa verso la casella della porta). Lascia che il topo cammini dall'estremità prossimale alla casella di porta. Rimuovi il mouse dalla casella della porta. Se il mouse si ferma sulla carta, spingere delicatamente il mouse verso la casella dell'obiettivo con il dito.
- Tieni premuto il mouse afferrando la collottola tra il pollice e l'indice per limitare il movimento degli arti anteriori. Quindi, afferra la parte posteriore e la coda tra il polpastrello del pollice e le altre dita per limitare il movimento degli arti posteriori.
nota: Una tenuta insufficiente del mouse provoca macchie di inchiostro sui vestiti.
- Immergere la parte inferiore degli arti anteriori in inchiostro rosso e la parte inferiore degli arti posteriori in inchiostro nero. Metti immediatamente il mouse sull'estremità prossimale del foglio (rivolgi la testa verso la casella della porta). Lascia che il topo cammini dall'estremità prossimale alla casella di porta. Se il mouse si ferma sulla carta, spingere delicatamente il mouse verso la casella dell'obiettivo con il dito.
- Rimuovi il mouse dalla casella della porta. Vai alla sessione di test.
3. Sessione di test
- Dopo la sessione di formazione, allestisci la pista per le impronte con un nuovo pezzo di carta bianca tagliato.
- Tieni premuto il mouse afferrando la collottola tra il pollice e l'indice per limitare il movimento degli arti anteriori. Quindi, afferra la parte posteriore e la coda tra la punta del pollice e le altre dita per limitare il movimento degli arti posteriori.
- Immergere la parte inferiore degli arti anteriori in inchiostro rosso e la parte inferiore degli arti posteriori in inchiostro nero. Metti immediatamente il mouse sull'estremità prossimale del foglio. Lascia che il topo cammini dall'estremità prossimale alla casella di porta.
NOTA: Poiché i topi preferiscono il buio, camminare diventa più stabile man mano che il mouse si avvicina alla casella della porta scura. Se il mouse si ferma sulla carta, spingere delicatamente il mouse verso la casella dell'obiettivo con il dito. Quindi, se non si ottengono footprint affidabili per l'analisi perché il mouse si è fermato, riprovare la sessione di test.
- Riporta il mouse nella gabbia di casa dalla casella della porta. Pulire la scatola delle porte con etanolo al 70% dopo ogni sessione di test. Asciugare all'aria la carta stampata.
4. Analisi delle impronte
- Ottenere tre misurazioni di ciascun parametro (lunghezze del passo degli arti anteriori e posteriori, larghezze della base anteriore e posteriore, sovrapposizione tra gli arti anteriori e posteriori, Figura 1B) con un righello da carta stampata a piedi.
nota: Poiché le impronte delle estremità prossimali e distali mostrano spesso grandi variazioni a causa dell'arresto o della corsa, scegli la parte con un modello di impronte a andatura costante. La parte centrale della carta stampata è solitamente adatta per l'analisi.
- Per la lunghezza del passo, misurare le distanze tra le stesse parti della zampa (ad esempio, il cuscinetto della zampa o la punta).
- Per la larghezza della base anteriore, tracciare una linea tra le impronte anteriori consecutive a destra (o a sinistra). Quindi, misura la lunghezza della linea verticale dal pad dell'impronta anteriore sinistra (o destra) alla linea tracciata tra le impronte destra (o sinistra).
- Per la larghezza della base posteriore, traccia una linea tra le impronte posteriori consecutive a destra (o a sinistra). Quindi, misura la lunghezza della linea verticale dal pad dell'impronta posteriore sinistra (o destra) alla linea tracciata tra le impronte destra (o sinistra).
- Per la sovrapposizione, misurare la distanza tra i cuscinetti delle impronte anteriori e posteriori sinistra (o destra).
- Fare la media delle tre misurazioni per ogni individuo. Utilizzare la media individuale di ciascun parametro per l'analisi statistica.
- Per la lunghezza del passo, utilizzare la media delle medie individuali dei passi sinistro e destro.
- Per l'asimmetria della lunghezza del passo, utilizzare il valore assoluto della differenza tra le medie individuali della lunghezza del passo dell'arto sinistro e della lunghezza del falcata dell'arto destro.
- Per l'analisi statistica degli altri parametri (larghezza della base anteriore, larghezza della base posteriore e sovrapposizione), utilizzare direttamente la media individuale.
