Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Chirurgia di Impianto di Headpost
NOTA: Garantire l'uso di strumenti sterili e organizzare l'intervento chirurgico e il recupero in diverse zone. Una volta padroneggiata, la procedura di impianto dura circa 30 minuti.
- Per l'analgesia, 30 minuti prima dell'inizio dell'intervento, iniettare per via sottocutanea buprenorfina (0,05 mg/kg) e rimettere l'animale nella sua gabbia di casa.
nota: Gli effetti analgesici della buprenorfina durano circa 12 ore, molto tempo dopo la fine della procedura. Nella nostra esperienza, i topi non mostrano alcun segno di disagio correlato a questo intervento, ma si raccomanda una dose successiva di 0,05 mg/kg di buprenorfina 24 ore dopo l'intervento.
- Anestetizzare l'animale in una camera con gas isoflurano al 2,5%-3%. Attendere 3 minuti e verificare se il topo è adeguatamente anestetizzato osservando la respirazione e la mancanza di movimento all'interno della camera. Passare il mouse su un cono nasale su un tavolo chirurgico con un termoforo e, pizzicando interdigitalmente, verificare che non vi sia riflesso di ritiro e abbassare l'isoflurano all'1,5%.
- Radere la testa del mouse usando un rasoio elettrico. Per ottenere un ambiente sterile, strofinare l'area rasata con una soluzione di iodio e successivamente con alcol al 70%. Ripetere questa procedura altre due volte.
- Iniettare lidocaina cloridrato (2%, 2 mg/kg) sotto la pelle della testa per l'anestesia locale e attendere 5 minuti per l'inizio degli effetti. Per evitare danni agli occhi dovuti alla secchezza, coprire gli occhi del topo con un unguento veterinario oftalmico topico.
- Con un paio di pinze smussate, afferra la pelle nella parte posteriore della testa e con un paio di forbici smussate (o bisturi), fai un'incisione longitudinale di circa 1,5 cm per esporre il cranio.
- Con l'aiuto di un bisturi, gratta il periostio. Fai attenzione a non graffiare troppo forte, poiché il fissaggio del palo della testa può essere compromesso se il cranio inizia a sanguinare leggermente.
- Applicare una goccia dell'attivatore verde (vedi Tabella dei materiali) al centro del cranio. Ciò migliorerà la fissazione del cemento aumentando la permeabilità ossea.
- Preparare il cemento: mescolare un cucchiaio (vedi Tabella dei Materiali) di polimero con cinque gocce di monomero e una goccia di catalizzatore. Con l'aiuto di un pennello, applicare una generosa quantità di miscela di cemento tra i punti di riferimento del teschio lambda e bregma.
- Posiziona rapidamente il palo sulla testa sul cemento con un movimento di scorrimento che va da lambda a bregma. Dopo che il palo è stato posizionato, riapplicare altro cemento attorno alla parte inferiore per assicurarsi che il palo aderisca correttamente al cranio. Per garantire un corretto fissaggio, assicurarsi che il cemento sia applicato abbondantemente e che si asciughi prima di proseguire con il passaggio successivo.
nota: Con questa procedura di fissaggio, il palo della testa non si staccherà e consentirà test ripetuti a lungo termine; Nelle nostre mani, la rimozione del palo della testa è del <10%.
- Preparare la miscela di resina applicando un rapporto polvere/liquido che consenta una consistenza liscia della miscela. Applicare la resina nel punto in cui è stato applicato il cemento e intorno al palo della testa per proteggerne la superficie.
- Attendere 3 minuti affinché la resina si asciughi e chiudere la pelle nella parte posteriore delle orecchie con sutura monofilamento. Con un batuffolo di cotone, applicare una soluzione di iodio diluita (10%-20%) sull'area operata.
nota: Assicurati che la pelle non si attacchi alla resina.
- Spegnere l'anestesia e posizionare l'animale sotto una luce calda rossa per evitare l'ipotermia. Metti il cibo inumidito e l'idrogel o un'altra fonte d'acqua a base di gel sul pavimento della gabbia. Non lasciare il topo incustodito fino a quando non riprende conoscenza. Non appena l'animale si riprende completamente dalla procedura (di solito, da 30 minuti a 1 ora dopo), mettilo in una gabbia con gruppi di tre o quattro per stimolare le interazioni sociali.