$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.
1. Iniezione intraperitoneale di cellule
NOTA: Nei nostri esperimenti, i topi vengono maneggiati in un flusso d'aria laminare o in una cabina di biosicurezza all'interno della nostra struttura di barriera per limitare il rischio di esposizione agli agenti patogeni. Al fine di dimostrare chiaramente questa tecnica, le procedure descritte nel video di accompagnamento sono state condotte in un laboratorio approvato per il lavoro sugli animali. Questa particolare tecnica non richiede che gli animali siano sotto anestesia. Secondo i protocolli approvati, eseguire questa tecnica su animali vivi. Utilizzare ceppi di topi appropriati per questo studio. Ad esempio: utilizzare topi nudi atimici immunocompromessi per lo studio della colonizzazione di cellule di cancro ovarico umano (SKOV3ip.1 e HeyA8); utilizzare topi immunocompetenti C57BL/6 per lo studio della colonizzazione delle cellule di cancro ovarico (ID8) di topo.
- Caricare 500 μl di sospensione unicellulare di cellule tumorali ovariche in una siringa e inserirla nell'ago sterile da 25 G con tappo. Ciò riduce il taglio cellulare prima dell'iniezione.
- Prendi il mouse per la collottola e tieni la coda usando il palmo e l'indice e fissa la zampa posteriore sinistra tra l'anulare e il mignolo (quando il mouse è trattenuto con la mano sinistra).
NOTA: Per evitare di traumatizzare gli organi addominali, trattenere bene il topo in modo che non possa muoversi durante l'iniezione.
- Immagina una linea che attraversa l'addome appena sopra le ginocchia e individua un punto sul lato destro dell'animale e vicino alla linea mediana. Il punto di ingresso è craniale e leggermente mediale dell'ultimo capezzolo.
nota: L'inserimento dell'ago sul lato destro del topo evita il cieco e riduce il rischio di perforare l'intestino.
- Inserire l'ago nella regione laterale inferiore dell'addome del topo a una profondità di circa 0,5 cm. Tirare indietro lo stantuffo per verificare che l'ago non sia penetrato in un vaso sanguigno o in altri organi peritoneali.
- Se viene aspirato del liquido, gettare la siringa (e il campione). Un aspirato bruno-verdastro o giallo indica la penetrazione dell'ago nell'intestino o nella vescica, rispettivamente.
- Iniettare il campione esercitando una pressione lenta e costante. Estrarre l'ago e rimettere il topo nella sua gabbia. Non richiudere la siringa prima di averla smaltita in un contenitore appuntito.
- Sacrificare i topi tramite asfissia da CO2 e rimozione di organi vitali in un momento specifico dopo l'iniezione.