Raccolta di depositi di grasso peritoneale: una tecnica per studiare la colonizzazione del cancro ovarico dei tessuti adiposi peritoneali in modelli murini

Abstract

Fonte: Krishnan, V. et al. In Vivo ed Ex Vivo Approcci per studiare la colonizzazione metastatica del cancro ovarico delle strutture della macchia lattiginosa nel adiposo peritoneale. J. Vis. Exp. (2015)

In questo video, utilizziamo un modello di topo femmina eutanasia portante di cancro ovarico. Descriviamo quindi un protocollo per identificare ed estrarre depositi di grasso o tessuti adiposi associati ai cinque organi peritoneali primari per studiare la colonizzazione delle cellule tumorali metastatiche.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparare gli animali per gli studi sperimentali

1. Consentire agli animali di acclimatarsi a nuovi alloggi e ambienti, per riprendersi dai potenziali effetti fisiologici del trasporto e della movimentazione.
   nota: La seguente tecnica è applicabile a tutti i ceppi di topi disponibili in commercio. Il numero di animali da utilizzare per un esperimento dipende dal disegno dello studio e deve essere effettuato con la consultazione di uno statistico.

2. Identificazione e isolamento dei depositi di grasso peritoneale

1. Eutanasia degli animali tramite overdose di CO₂ e un metodo fisico secondario per confermare la morte.
2. Poiché il prelievo di depositi di grasso peritoneale costituisce la rimozione di organi interni (metodo secondario), praticare un'incisione sulla linea mediana vicino alle papille inguinali attraverso la parete peritoneale per esporre gli organi interni (Figura 1A).
3. Per il grasso omentale (OM), esporre il complesso omentale/pancreatico estendendo la milza dalla cavità peritoneale con una pinza (Figura 1C). Rilasciare l'omento dal pancreas e dalla milza tagliando accuratamente tutte le connessioni tissutali. Assicurarsi che il tessuto pancreatico rimanente sia asportato.
4. Per il grasso gonadico (GF), utilizzare una pinza per sollevare il grasso gonadico che circonda le ovaie e asportare tagliando le connessioni tissutali (Figura 1A in alto a destra).
5. Per il grasso uterino (UF), utilizzare una pinza per sollevare il grasso uterino che circonda le corna uterine e asportare tagliando le connessioni tissutali (Figura 1A in basso a destra).
6. Per il grasso mesenterico (MF), tagliare la giunzione tra l'intestino tenue e il piloro. Usa una pinza per afferrare saldamente l'estremità libera dell'intestino tenue e "staccarlo" lentamente dal grasso mesenterico. Rilasciare il grasso mesenterico dalla radice mesenterica utilizzando le forbici da dissezione (Figura 1A in basso a sinistra).
7. Per il grasso splenoportale (SF), sollevare l'estremità distale della milza usando una pinza per esporre la sottile banda di tessuto adiposo che collega l'ilo della milza al pancreas. Asportare il grasso splenoportale rilasciandolo prima dal pancreas e poi sezionandolo accuratamente dalla milza (Figura 1B).

Risultati

Figura 1. Le relative sedi e strutture dei principali depositi adiposi peritoneali. (A)Dissezione anatomica macroscopica che mostra la posizione relativa di quattro delle cinque fonti primarie di grasso peritoneale. Vengono mostrati l'omento (OM; delineato), il grasso gonadico (GF), il grasso uterino (UF), il mesentere (MY), l'ovaio (ov), le corna uterine (uh) e l'intestino tenue (si)...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Strumenti di dissezione	Strumenti per la scienza	Na
Pbs	Corning	21-040-CV	Senza calcio e magnesio