Tutte le procedure che coinvolgono partecipanti umani sono state eseguite in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono state esaminate dal comitato di revisione istituzionale locale.
1. Colorazione
- Prima di procedere con la colorazione, rimuovere le soluzioni in eccesso attorno al fazzoletto sul vetrino con carta velina.
- Posizionare i vetrini a temperatura e umidità ambiente per evitare l'essiccazione del tessuto sul vetrino durante l'intero processo di colorazione.
- Ossidare i vetrini con alcune gocce di permanganato di potassio per 5 minuti. Assicurarsi che il volume di permanganato di potassio sia sufficiente a coprire la sezione di tessuto su ogni vetrino.
- Sciacquare i vetrini ossidati con acqua distillata in un barattolo Coplin con 2-3 cambi. Osserva il colore blu del tessuto.
- Ora, sbiancare questi vetrini aggiungendo alcune gocce di acido ossalico per 5 minuti. Assicurarsi che il volume di acido ossalico sia sufficiente a coprire completamente la sezione di tessuto su ogni vetrino.
- Sciacquare i vetrini immergendoli nel barattolo Coplin riempito con acqua distillata. Eseguire il risciacquo 2x-3x.
- Lavare brevemente questi vetrini in alcool al 95%, quindi immergerli in una soluzione di elastina (5 g/L) per 8-24 h.
nota: La soluzione di elastina è volatile e il suo tempo di colorazione è relativamente lungo, quindi è meglio immergere i vetrini con colorazione elastica in un contenitore sigillato, come una bottiglia di vetro trasparente con tappo di chiusura. La capacità del contenitore e il volume della soluzione di elastina dipendono dal numero di vetrini immersi, purché consenta la completa immersione di tutti i vetrini.
- Immergere questi vetrini direttamente in etanolo al 95% per 1-2 minuti per differenziare bene ogni sezione di tessuto.
nota: La differenziazione si riferisce alla variazione della carica della sezione di tessuto, che rimuove la colorazione in eccesso assorbita dal tessuto e rende i colori più chiari. Dopo la colorazione con soluzione di elastina, i campioni non devono essere lavati con acqua distillata per evitare qualsiasi difficoltà di differenziazione. Controllare al microscopio, se necessario, la presenza di macchie di fibre elastiche blu-nere e sfondo grigio. È meglio sottodifferenziare leggermente il tessuto poiché la successiva colorazione di contrasto di Van Gieson può anche estrarre in qualche modo la macchia elastica.
- Sciacquare completamente questi vetrini con acqua distillata dopo la differenziazione.
- Controcolorare i vetrini nella soluzione di Van Gieson per 1 min.
nota: Il volume della soluzione di Van Gieson deve essere sufficiente per poter immergere completamente la sezione di tessuto su ogni vetrino.
