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1. Dividere gli sferoidi SBNET
NOTA: Questo viene fatto per l'espansione e per la condivisione con altri ricercatori.
- Utilizzare una pipetta P1000 per rompere meccanicamente l'ECM e aspirare l'ECM con sferoidi SBNET in una provetta sterile da 1,5 mL.
- Centrifugare a 1.000 x g a 4 °C, rimuovere tutto il surnatante e mettere la provetta sul ghiaccio.
- Aggiungere 2-4 volte il volume del nuovo ECM al pellet. Miscelare il nuovo ECM con i vecchi sferoidi ECM e SBNET pipettando su e giù 10 volte, evitando l'introduzione di bolle d'aria.
- Trasferire 5-20 μl della miscela di sferoidi ECM e SBNET su una nuova piastra e lasciare che l'ECM si solidifichi.
- Coprire con il nuovo terreno SBNET e trasferire nell'incubatrice. Il tasso di recupero è compreso tra il 95% e il 100% circa.
- Per spedire gli sferoidi SBNET a un altro laboratorio, trasferire gli sferoidi SBNET con il nuovo ECM in un pallone T25 e lasciare che l'ECM si solidifichi.
- Riempire il pallone T25 con il terreno sferoidale SBNET, avvitare saldamente il tappo e preparare il pacco di spedizione.
- Dopo aver ricevuto una coltura sferoidale SBNET, rimuovere il terreno di coltura ed eseguire i passaggi da 1.1 a 1.5 per reinserire gli sferoidi SBNET nella lingua.