Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Gastrectomia a manica verticale e procedure fittizie
- Il giorno dell'intervento, pesare i topi per ottenere una misurazione del peso di base.
- Dotare la sala chirurgica di un sistema di anestesia, bagno d'acqua riscaldato e termoforo. Impostare il bagnomaria a 37 °C e utilizzarlo per riscaldare una soluzione salina allo 0,9% per l'irrigazione. Pulire il campo chirurgico con etanolo al 70% e utilizzare una tecnica sterile per aprire la confezione e gli strumenti chirurgici autoclavati.
nota: Il termoforo viene utilizzato per mantenere l'animale al caldo durante l'intervento chirurgico e il recupero dall'anestesia.
- Utilizzando una camera di induzione, anestetizzare il topo con isoflurano al 5% e una portata di O2 di 1 L/min. Verificare che il topo si trovi nel piano di anestesia appropriato eseguendo un pizzicamento delle dita. Mantenere il mouse con isoflurano all'1-3% e una portata di O2 di 0,6 L/min una volta raggiunto un piano di anestesia costante.
- Una volta che il topo è stato anestetizzato, posizionare un unguento per gli occhi (vedi Tabella dei materiali) sugli occhi per mantenerli umidi durante l'intervento chirurgico. In questo momento, somministrare anche un analgesico, come il meloxicam (2 mg/kg per via sottocutanea). Aggancia i peli dall'ombelico all'ascella tenendo delicatamente la pelle verso il basso per fornire tensione.
- Poiché la pelle del topo è sottile e delicata, fare attenzione a non causare lesioni cutanee durante il taglio dei peli. Pulire la pelle con iodio povidone e alcool.
- Indossare guanti sterili e preparare il campo chirurgico sterile e gli strumenti. Eseguire il resto della procedura utilizzando una tecnica sterile. Preparare il campo chirurgico sterile posizionando teli chirurgici sterili su entrambi i lati del topo. Usa un foglio di latta autoclavato per creare un telo chirurgico per il topo.
- Praticare un piccolo foro nella carta stagnola per consentire l'accesso all'addome del topo.
- Praticare un'incisione della pelle dalla metà dell'addome (ombelico) al livello della cartilagine xifoidea utilizzando una forbice dell'iride. Identifica la linea alba e usa le forbici dell'iride per tagliare la parete del corpo lungo la linea alba. Usa le CTA per sollevare delicatamente lo stomaco dall'addome e poi seziona senza mezzi termini l'omento maggiore dalla curvatura maggiore dello stomaco.
- Legare la corta arteria gastrica che corre tra il fondo dello stomaco e la milza posizionando due legature utilizzando una sutura assorbibile monofilamento 7-0. Usa le forbici a molla per tagliare tra le due legature. Una volta sezionato l'arteria, esteriorizzare completamente lo stomaco dalla cavità addominale. Mettere una garza sotto lo stomaco e bagnarla con soluzione fisiologica per mantenere umido il tessuto.
- Per la procedura VSG, legare i rami prominenti dell'arteria gastrica e della vena con sutura assorbibile in monofilamento 7-0 con un ago conico utilizzando 3 lanci per ogni nodo. Posizionare le legature appena sotto (cioè verso la minore curvatura dello stomaco) la linea di trassezione prevista.
nota: La linea di transezione prevista inizia a ~2 mm sopra (cioè verso la maggiore curvatura dello stomaco) l'incisura cardiaca dello stomaco e almeno 2 mm sotto il margo pilcatus e si estende fino all'estremità prossimale del lobo destro del pancreas. In genere, ci sono 4 vasi per parete gastrica che devono essere legati; Tuttavia, questo può variare tra i topi.
- Per evitare la fuoriuscita del contenuto gastrico durante la gastrectomia, posizionare una semplice linea continua di sutura che passa attraverso entrambe le pareti gastriche appena sotto la linea di trassezione prevista utilizzando una sutura assorbibile in monofilamento 6-0 con un ago conico. Inizia la linea di sutura a destra del chirurgo dell'esofago e sotto il margo pilcatus e termina appena sopra il pancreas.
- Posizionare gli emostatici a punta sottile sopra la linea di sutura e utilizzare le forbici a molla per tagliare tra la linea di sutura e gli emostatici. Rimuovere il tessuto gastrico sezionato dal campo chirurgico sterile. Usa gli CTA per pulire il sangue e digerire lo stomaco.
- Rinforzare l'apposizione delle pareti gastriche utilizzando una sutura assorbibile in monofilamento 6-0 con un ago conico utilizzando un semplice schema discontinuo.
nota: Si consiglia un semplice modello di sutura discontinuo poiché ciò fornisce una chiusura più sicura rispetto al semplice modello di sutura continua.
- Sciacquare il residuo gastrico con soluzione salina durante tutta la procedura per mantenere il tessuto umido e pulito. Utilizzare un ago da 20 G collegato a una siringa da 20 ml per eseguire la lavanda gastrica con soluzione fisiologica. Utilizzare questa dimensione per garantire una pressione adeguata senza rischiare danni al tessuto gastrico dovuti a una pressione eccessiva o danni accidentali al tessuto gastrico dovuti all'uso di un normale ago appuntito.
- Utilizzare un minimo di 20 nodi per chiudere saldamente lo stomaco; prestare attenzione alla chiusura lungo il lato esofageo, poiché questo lato è più difficile da raggiungere e quindi è spesso un sito di deiscenza.
- Assicurarsi che non ci siano perdite premendo delicatamente sullo stomaco con CTA. Se vengono identificate perdite, posizionare ulteriori semplici nodi discontinui sulle aree di perdita e quindi ripetere il test di tenuta. Test di tenuta fino a quando non viene rilevata alcuna perdita.
- Eseguire un lavaggio finale accurato dello stomaco utilizzando almeno 60 ml di soluzione fisiologica per assicurarsi che non siano rimaste particelle infettive.
- Riposiziona lo stomaco nella cavità addominale sotto il fegato usando un CTA. Posiziona i CTA lungo la faccia dorsale della cavità addominale per assorbire tutto il liquido in eccesso. Utilizzando un ago smussato da 18G, iniettare la soluzione di Ringer lattato (LRS) con o senza antibiotici (0,5 mL LRS +/- 20 mg/kg di Enrofloxacina) direttamente nella cavità addominale, appena prima della chiusura.
nota: Questo sostituisce la perdita di liquidi sperimentata durante l'intervento chirurgico e fornisce un metodo per l'applicazione diretta di antibiotici al sito chirurgico per favorire il recupero.
- Chiudere lo strato muscolare addominale utilizzando una sutura assorbibile in monofilamento 6-0 con un ago conico in un semplice schema discontinuo. Quindi, chiudere lo strato cutaneo con sutura assorbibile in monofilamento 6-0 in un semplice schema continuo.
- Posizionare l'adesivo in tessuto sulla pelle e piegare la pelle sulla linea di sutura per seppellire la sutura in modo che il topo non possa interrompere la chiusura della ferita dopo l'intervento.
- Spegni l'isoflurano e lascia che il mouse si riprenda sul termoforo per 10-15 minuti prima di rimetterlo nella sua gabbia di casa. Non lasciare l'animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza ed è in grado di muoversi.
- Tenere gli animali alloggiati da soli fino a quando non si sono completamente ripresi dall'intervento chirurgico.
nota: Se si vogliono ottenere misurazioni accurate dell'assunzione di cibo durante lo studio, i topi dovrebbero continuare a essere alloggiati singolarmente durante lo studio. C'è il rischio di ostruzione di corpi estranei dal consumo di lettiera domestica. Gli animali devono essere alloggiati in gabbie prive di lettiere, ad eccezione del materiale di nidificazione per fornire un arricchimento (vedi Tabella dei materiali).
