Estrazione del muscolo scheletrico degli arti posteriori: una procedura per asportare i muscoli scheletrici degli arti posteriori dal modello murino

Abstract

Fonte: Bonetto, A. et al. Il topo portatore di tumore con carcinoma del colon-26 come modello per lo studio della cachessia tumorale. J. Vis. Exp. (2016)

In questo video, descriviamo la procedura per asportare i muscoli scheletrici degli arti posteriori da un modello murino. I muscoli asportati possono essere conservati a temperature più basse fino a un'ulteriore analisi a valle.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Escissione di tessuti e organi

NOTA: Per l'uso di tessuti in saggi di biologia biochimica o molecolare, pianifica di pesare ogni organo e tessuto e posizionare immediatamente un frammento in criotubi pre-marcati. Congelare a scatto in azoto liquido e conservare a -80 °C.

1. Per evitare la contaminazione dei campioni di tessuto con la pelliccia, spruzzare etanolo al 70% su tutto il corpo.
2. Posizionare il mouse su un lettino di dissezione in posizione supina ed estendere un arto verticalmente attaccando il piede a un morsetto per buretta rialzato.
3. Afferra la pelle dell'arto inferiore con la pinza Dumont e usa le forbici sottili curve per rimuovere delicatamente la pelle e la fascia, esponendo il ventre muscolare sottostante dell'arto inferiore.
4. Identificare il muscolo gastrocnemio sull'arto inferiore posteriore in base alla sua origine ai condili laterali e mediali sul femore posteriore e alla sua inserzione nel calcagno attraverso il tendine calcaneare.
   1. Procedere al taglio del tendine calcaneare del gastrocnemio. Afferrare l'estremità distale del gastrocnemio con la pinza di Dumont e tirare il ventre muscolare verso la sua origine. Usando le forbici, taglia il muscolo all'origine il più vicino possibile al femore. Metti il muscolo in un piatto. Pesarlo immediatamente e congelarlo in una provetta in azoto liquido.
      nota: Assicurati di non asportare il muscolo soleo insieme al gastrocnemio. In tal caso, rimuovere con cautela il soleo estraendolo delicatamente con la pinza.
5. Procedere all'identificazione e all'asportazione del muscolo tibiale anteriore dalla sua origine sulla superficie anterolaterale della tibia e dalla sua inserzione nel cuneiforme mediale attraverso il suo tendine distale.
   1. Per avere leva, tenere il piede afferrando le dita con l'indice e il pollice. Inserire la punta della pinza Dumont immediatamente sotto il tendine distale superficiale del tibiale e muovere la pinza in modo tale che il lato smussato possa essere utilizzato per staccare il ventre del muscolo tibiale dal tessuto connettivo sottostante.
   2. Tagliare il tendine distale con le forbici sottili e ricurve e poi tagliare il muscolo all'origine il più vicino possibile alla tibia.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Topi CD2F1	Harlan	60
Apparecchio per anestesia	EZ-Anestesia	EZ-7000
OTTOBRE	Tessuto-Tek	4583
criostato	Leica	CM1850
Dischi di sughero	Scienze della microscopia elettronica	Codice 63305
Microtainer	Bd	365873
Vetrini Superfrost plus	VWR	48311-703
Streptomicina-Penicillina	Cellgro	30-002-CI