Inoculazione intramucosa di cellule tumorali in modello murino: una procedura per stabilire un modello murino di cancro ortotopico della testa e del collo

Abstract

Fonte: Oweida, A. J. et al. Inoculazione intramucosa di cellule di carcinoma a cellule squamose nei topi per la profilazione immunitaria tumorale e la valutazione della risposta al trattamento. J. Vis. Exp. (2019)

In questo video, sviluppiamo un modello murino ortotopico di cancro della testa e del collo mediante inoculazione intramucosa della linea cellulare di carcinoma a cellule squamose. Il topo portatore di tumore mostrerebbe somiglianze con i sintomi clinicamente rilevanti della malattia umana e può quindi essere utilizzato per studiare la progressione del cancro e scoprire nuove strategie terapeutiche.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Iniezione di cellule nei topi

1. Preparare una miscela 1:1 di cellule:matrice di membrana basale (50 μL ciascuna).
2. Aggiungere prima le cellule, quindi pipettare gradualmente la matrice della membrana basale. Evitare l'introduzione di bolle d'aria. Assicurarsi che la miscela sia preparata immediatamente prima dell'iniezione nell'animale. L'aggiunta di cellule alla matrice della membrana basale per un periodo di tempo prolungato può provocare l'insediamento delle cellule nella miscela della matrice, il che rende la miscela difficile da agitare vigorosamente. Ciò causerà una notevole variabilità nelle dimensioni del tumore tra i topi.
3. Mescolare delicatamente. Assicurarsi che tutti i passaggi che coinvolgono la matrice vengano eseguiti su ghiaccio. La matrice della membrana basale polimerizzerà a temperatura ambiente.
4. Preparare le siringhe per l'inoculazione.
5. Caricare 0,5 mL di siringhe da insulina (23G) con 100 μL di soluzione di matrice cellulare/membrana basale.
6. Tenere le siringhe sul ghiaccio per evitare la polimerizzazione della matrice della membrana basale.
7. Anestetizzare i topi mettendoli in una camera con isoflurano e ossigeno (2,5%).
8. Assicurarsi che i topi siano profondamente anestetizzati prima di eseguire l'iniezione (assicurandosi che non rispondano a un pizzico di dita).
9. Inserire l'ago nella regione buccale destra o sinistra. Questo viene eseguito attraverso lo spazio aperto disponibile su entrambi i lati della bocca.
10. Assicurarsi che la lingua del mouse non sia d'intralcio.
    NOTA: È facile colpire la lingua, il che provocherà tumori alla lingua. Se necessario, sposta la lingua sul lato opposto.
11. Tenere la siringa parallela alla regione buccale mentre si trova all'interno della cavità orale.
12. Quando è pronta per l'iniezione, tirare indietro la siringa e inserirla lentamente con un angolo di 10°.
13. Iniettare 100 μl della sospensione della matrice cellulare/membrana basale per un periodo di 5 s.
14. Tenere la siringa in posizione per altri 5 secondi per assicurarsi che tutto il materiale venga iniettato.
    NOTA: Per i topi di controllo non portatori di tumore, iniettare una miscela di terreni e matrice privi di siero (come descritto sopra) senza le cellule tumorali.
15. Estrarre delicatamente la siringa.
16. Continua la procedura di cui sopra con i topi rimanenti.
17. Attendere 1 settimana fino a quando i tumori iniziano a comparire in modo macroscopico (50-200^mm3 per le cellule B4B8 e LY2).

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
S.b.B	ThermoFisher Scientifico	14175079	Senza calcio, senza magnesio, senza fenorosso
Citometro di massa Helois	Fluidigm	Na
Matrice a membrana Matrigel	Corning	CB-40234B

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