Raccolta della membrana corioallantoica di pulcino: un metodo per isolare la membrana corioallantoidea portatrice di innesto tumorale dall'uovo di gallina

In questo articolo

Abstract

Fonte: Schmidt, L. B. et al. Il modello in vivo della membrana corioallantoica del pulcino per valutare l'invasione perineurale nel cancro della testa e del collo. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video dimostra l'isolamento della membrana corioallantoidea tumorale dall'embrione di pollo. Il CAM raccolto può essere utilizzato per ulteriori applicazioni a valle.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Raccolta del CAM

Preparare piastre a 6 pozzetti con PFA (paraformaldeide) al 4% di pH 7,0; un pozzetto per uovo, 2 mL per pozzetto.
Porta le uova su un banco da laboratorio. Utilizzando un ago collegato a una siringa per perforare la medicazione in film, far cadere circa 300 μL di PFA sul CAM per irrigidire leggermente il CAM, facilitando così il processo di raccolta. Ripeti l'operazione per tutte le uova.
Con una forbice, rimuovere la metà superiore del guscio d'uovo (dove si trova la finestra operativa) con la CAM attaccata ad essa (Figura 1I). Ridurre le dimensioni di questa metà a circa 3 cm di diametro. Afferrare la camma con una pinza fine e staccarla dal guscio dell'uovo mentre la si inserisce nel PFA.

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Risultati

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Figura 1: Innesto di DRG, cellule e raccolta di CAM: Il giorno 8: A. CAM facilmente osservabile dopo la rimozione della membrana di cera di paraffina. B-C. Con una pinza fine, il DRG viene posizionato sulla CAM. D. L'uovo viene coperto con pellicola e messo nell'incubatrice; Le frecce indicano le aperture coperte. Il giorno 10: E-F. La me...