Modellazione del trattamento intratumorale con inibitori dei miRNA: un metodo per analizzare l'effetto degli inibitori dei miRNA sulla crescita tumorale nel modello murino

Abstract

Fonte: Ramirez-Moya, J. et al. Inibizione in vivo del microRNA per diminuire la crescita tumorale nei topi. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video dimostra la somministrazione in vivo di inibitori di miRNA come agenti terapeutici contro la crescita tumorale in modelli murini ortotopici. La somministrazione intratumorale di inibitori sintetici dei miRNA o antagomi consente loro di legarsi e inibire i miRNA endogeni, causando così la sovraregolazione dell'mRNA e la soppressione della crescita tumorale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Inoculazione delle cellule sul fianco e trattamento degli antagomi intratumorali

1. Preparazione delle cellule
   1. Ingegnerizzare una linea cellulare di carcinoma tiroideo umano Cal62 (mutazioni KRASG12R e p53A161D) per sovraesprimere un costrutto transgenico che esprime costitutivamente GFP e luciferasi (CMV-Firefly Luc-IRES-eGFP). Selezionare le cellule transgeniche in base alla resistenza agli antibiotici o selezionando le cel....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Matrice della membrana basale: Matrice della membrana basale Matrigel ad alta concentrazione	Corning	#354248
AntagomiR: inibitore del miRNA mirVana	Thermo Fisher	4464088	Pronto per l'uso in vivo
Reagente di somministrazione in vivo: Reagente Invivofectamine 3.0	Thermo Fisher	FIV 3005
Controllo negativo: mirVana miRNA Inibitore, Controllo Negativo #1	Thermo Fisher	4464077	Pronto per l'uso in vivo
XenoLight D-Luciferin - Substrato bioluminescente al sale K+	PerkinElmer	122799	Diluito in PBS
Software di imaging in vivo: IVISLumina II Imaging System	Calibro per le scienze della vita