$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Prelievo del midollo spinale
- Sopprimere il topo utilizzando una camera di CO2. Evitare la lussazione cervicale in quanto potrebbe causare danni alle radici del ganglio a causa delle forze di taglio. Da qui in poi, eseguire tutti i passaggi in condizioni sterili.
- Immergere l'animale con etanolo al 70%. Questo passaggio è importante per la sterilizzazione e per evitare che i peli si trascinino attraverso gli organi interni.
- Lascia asciugare il mouse dall'etanolo. Prevenire qualsiasi contatto dell'etanolo con gli organi interni a causa della neurotossicità.
- Dopo aver asciugato il mouse, posizionarlo utilizzando gli spilli in posizione prona (a faccia in giù). Posiziona gli spilli su ogni zampa posteriore e anteriore.
- Usando una pinza, praticare un'incisione sulla linea mediana che si estende cranio-caudalmente dalla parte posteriore del collo alla colonna lombare. Successivamente, sollevare i lembi dermici bilateralmente utilizzando una pinza ed esporre il tessuto sottocutaneo.
- Palpare il cranio del topo fino a raggiungere la giunzione craniocervicale. Usando le forbici perpendicolari all'animale, tagliare i muscoli cervicali e la colonna vertebrale alla giunzione craniocervicale (la 7avertebra cervicale), usando una pinza pesante. Sezionare la colonna vertebrale caudalmente e asportare la colonna vertebrale con una pinza pesante fino a raggiungere il livello lombare (livello degli arti posteriori).
- Eseguire una transezione caudale completa a livello della colonna lombare (la 5a vertebra lombare) utilizzando una pinza pesante.
- Passa il mouse sopra (a faccia in su). Non è necessario coprire l'incisione poiché il DRG viene estratto dai livelli vertebrali inferiori e non dalla cervicale.
- Tagliare la linea mediana dal collo all'addome, ritrarre la pelle lateralmente e poi tagliare per aprire il peritoneo.
- Rimuovere in blocco gli organi interni all'interno del peritoneo (fegato, milza, pancreas, stomaco e intestino). Quindi, rimuovere gli organi retroperitoneali (cioè reni e pancreas). Cranialmente, apri la parete toracica.
- Utilizzando una pinza e una lama chirurgica, tagliare le costole, lasciando 5 mm di costole bilateralmente lontane dalla colonna vertebrale. A questo punto, la colonna vertebrale è separata dal resto del corpo.
- Lavare la colonna vertebrale dal sangue con soluzione salina fresca tamponata con fosfato (PBS) fredda (4 °C) due volte.