Preparazione dell'impalcatura esofagea suina decellularizzata: una tecnica per generare un'impalcatura acellulare da un esofago di maiale

Abstract

Fonte: Green, N. H. et al. Produzione, caratterizzazione e potenziali usi di un modello 3D di mucosa esofagea umana ingegnerizzata in tessuto. J. Vis. Exp. (2015)

In questo video, dimostriamo la preparazione di un'impalcatura di esofago di maiale decellularizzata, con la sua architettura biochimica e composizione conservate, per applicazioni di ingegneria tissutale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione di scaffold esofageo decellularizzato

1. Ottenere esofagi suini intatti in un macello da suini Landrace appena macellati che vengono utilizzati per la produzione alimentare. Un singolo esofago fornirà impalcature sufficienti per circa 30 costrutti separati.
   nota: A causa dell'ampio e dispendioso protocollo di sterilizzazione richiesto, normalmente vale la pena ottenere ed elaborare un minimo di 10 eso....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
DMEM	Tecnologia del laboratorio	Pannello LM-D1112	Scaldare a bagnomaria a 37 °C prima dell'uso
F12 di Ham	Tecnologia del laboratorio	LM-H1236	Scaldare a bagnomaria a 37 °C prima dell'uso
Siero fetale di vitello	Tecnologia del laboratorio	FB-1090
Fattore di crescita epidermico	Sistemi di R+S	236-EG-200	Preparare 200 μg/ml di soluzione madre in acido acetico 10 mM, 1% FCS
Tossina del colera	Sigma-Aldrich	Codice: C8052	Preparare la soluzione madre in acqua
L-Glutammina	Sigma-Aldrich	G7513
Penicillina-Streptomicina	Sigma-Aldrich	P0781
Amfotericina B	Gibco	Codice 15290-026	Marchio Fungizone
Pbs	Ossoide	BR0014	Sciogliere 1 compressa in 100 ml di acqua e sterilizzare in autoclave
Collagenasi A	Roche	10103578001
Soluzione di iodio povidone	Ecolab	Codice 10830E	Marchio Videne
etanolo	Sigma-Aldrich	E7023
Chelex 100	Sigma-Aldrich	Visualizzazione del materiale C7901
Siero per vitelli appena nati	Gibco	26010074
Tubo universale da 15 ml	Sls	SLS7504
Vaso da 180 ml	VWR	Codice 216-2603