Coltura di salisfere dal tessuto delle ghiandole salivari: un metodo per sviluppare salisfere da cellule epiteliali derivate dalle ghiandole salivari umane

Abstract

Fonte: Beucler, M. J., Miller, W. E. Isolamento di cellule epiteliali salivari da ghiandole salivari umane per la crescita in vitro come salisfere o monostrati. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video presenta il protocollo per la coltura delle salisfere, gli sferoidi tridimensionali derivati dalle ghiandole salivari. Le salisfere possono essere ulteriormente utilizzate per valutare l'impatto del cancro della testa e del collo sulla produzione di saliva dalle ghiandole salivari dei pazienti umani affetti.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono partecipanti umani sono state eseguite in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono state esaminate dal comitato di revisione istituzionale locale.

1. Digestione dei tessuti

1. Utilizzando una piastra di coltura tissutale da 100 mm, tritare meccanicamente il tessuto in pezzi sottili di dimensioni ~1-2 mm utilizzando forbici da dissezione sterilizzate in autoclave e pinze chirurgiche (Figura 1B, C). Il tessuto connettivo tra i pezzi deve essere tagliato per garantire una corretta separazio....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piastre di coltura da 100 mm	Termo Scientifico	172931
Provette coniche da 15 mL	Termo Scientifico	339651
Provette coniche da 50 mL	Termo Scientifico	339653
Terreni di crescita delle cellule epiteliali bronchiali	Lonza	CC-3171	Aggiungere il kit proiettili secondo le istruzioni del produttore. Integrare con 20 ml di siero strippato al carbone.
Filtro cellulare Rete in nylon da 70 μm	pescatore	Codice 22-363-548
Siero fetale bovino spogliato al carbone	Gibco	Codice 12676-029
Collagenasi tipo III	Worthington	LS004182	Conservare a 4 °C.
Dispase	Applicazioni cellulari	Codice: 7923	Sciogliere la collagenasi per ottenere una riserva dello 0,15% (p/v). Filtrare, sterilizzare, quindi conservare a -20 °C.
Forbici da dissezione	pescatore	08-940
Soluzione salina tamponata con fosfato di dulbecco	Corning	55-031-PC
Estratto di membrana basale PathClear	Cultrex	Codice 3432-005-01	Scongelare a 4 °C almeno 24 ore prima dell'uso. Maneggiare sempre con ghiaccio.
Piatti di coltura a sei pozzetti	Falcone	353046
Pinze chirurgiche	pescatore	22-079-742