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Articolo metodologico

Isolamento dei neuroni del midollo spinale: una procedura di gradiente di densità per isolare i neuroni del midollo spinale neonatale per studi in vitro

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22 dicembre 2025

In questo articolo

Sommario

[INSERIRE FIGURE1 QUI]

Figura 1: Colonna vertebrale sezionata e midollo spinale rilasciato da un topo neonatale di 3 giorni. La freccia in (a) punta verso l'estremità caudale della colonna vertebrale, dove viene inserito un ago per rilasciare il midollo spinale. Un midollo spinale rilasciato (b) viene mostrato immerso nel PBS.

[INSERIRE FIGURE2 QUI]

Figura 2: Gradiente di densità, con l'aggiunta di cellule dopo la centrifugazione. I livelli sono delineati e meglio visualizzati sulla rappresentazione del cartone animato. Lo strato più superficiale (0) è generalmente costituito da detriti provenienti dal tessuto del midollo spinale. Lo strato 1 è ricco di oligodendrociti e astrociti. Gli strati 2 e 3 contengono la maggior parte dei neuroni. Mentre lo strato 3 contiene neuroni con la massima purezza, alcune cellule di supporto (cioè astrociti e oligodendrociti) si trovano nello strato 2. Il pellet sul fondo contiene principalmente cellule microgliali.

Abstract

Fonte: Eldeiry, M. et al. Isolamento e coltura dei neuroni del midollo spinale da topi neonatali. J. Vis. Exp. (2017)

In questo video descriviamo un protocollo passo-passo per isolare i neuroni del midollo spinale da un topo neonatale per studi in vitro.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Prelievo del midollo spinale

NOTA: Tutti gli strumenti devono essere sterilizzati in autoclave (135 °C e 30 psi per cicli di 4 x 7 minuti).

  1. Eutanasia di cuccioli di topo C57BL/6 di 1-3 giorni in una camera con isoflurano. Attendere 30 s dopo la cessazione del movimento e pizzicare la gamba per confermare la mancanza di risposta.
  2. Separare la testa dal corpo usando le forbici, con i....

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Risultati

figure-results-1
Figura 1: Colonna vertebrale sezionata e midollo spinale rilasciato da un topo neonatale di 3 giorni. La freccia in (a) punta verso l'estremità caudale della colonna vertebrale, dove viene inserito un ago per rilasciare il midollo spinale. Un midollo spinale rilasciato (b) viene mostrato immerso nel PBS.

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Ibernazione A Medium - 500 mLTermo-FisherA1247501https://www.thermofisher.com/ ordine/catalogo/prodotto/A1247501
Ibernato A Meno Calcio - 500 mLPezzi di cervelloHA-Cahttp://www.brainbitsllc.com/ ibernazione-a-meno-calcio/
Glutamax 100X - 100 mlTermo-Fisher35050061https://www.thermofisher.com/ ordine/catalogo/prodotto/35050079
Integratore B27 50X - 10 mLTermo-Fisher17504044https://www.thermofisher.com/ ordine/catalogo/prodotto/17504044
Papaina, liofilizzata - 100 mgWorthingtonLS003119http://www.worthington- biochem.com/pap/cat.html
Terreno neurobasale A - 500 mLTermo-Fisher10888022https://www.thermofisher.com/ ordine/catalogo/prodotto/10888022
Penicillina-Streptomicina (10.000 U/mL)Termo-Fisher15140122https://www.thermofisher.com/ ordine/catalogo/prodotto/15140122
Bromidrato di poli-D-lisina (PDL) - 5 mgSigma-AldrichP6407-5MGhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/sigma/p6407? lang=en®ion=US
Laminina di topo - 1 mgTermo-Fisher23017015https://www.thermofisher.com/ ordine/catalogo/prodotto/23017015
Trypan Blu - 20 mlSigma-AldrichT8154-20MLhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/sigma/t8154? lang=en®ion=US
OptiPrep Gradiente di densità medio-250 mLSigma-AldrichD1556-250MLhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/sigma/d1556? lang=en®ione=USA
Diclorodimetilsilano (DMDCS, Sigma Silicoat)Sigma-Aldrich440272-100MLhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/aldrich/440272? lang=it®ione=USA
cloroformioSigma-AldrichCodice 288306-1Lhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/sial/288306? lang=en®ion=US
Pippette in vetro - 9"Sigma-Aldrich13-678-20Chttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/sigma/cls7095d9? lang=it®ione=USA
Pipetta a bulbo - 5 mLSigma-AldrichZ186678-3EAhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalog/product/aldrich/z186678? lang=en®ion=US&cm_sp=Insite-
_-prodRecCold_xviews-_- prodRecCold10-1
Piastra di Petri BRAND®, vetro - 60 x 15 mmSigma-AldrichBR455717-10EAhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/aldrich/br455717? lang=en®ion=US
Piastra sterile per colture cellulari a 24 pozzettiSigma-AldrichCodice: M8812-100EAhttp://www.sigmaaldrich.com/ catalogo/prodotto/sigma/m8812? lang=en®ion=US

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