Dissezione del tessuto del palato da un modello murino adulto: una procedura chirurgica per prelevare il palato duro e il palato molle dalla cavità orale di un topo adulto

In questo articolo

Abstract

Fonte: Xuan Ngo, Y. et al. Isolamento e coltura di cheratinociti orali primari dal palato del topo adulto.(2021)

Questo video mostra una procedura chirurgica per sezionare il tessuto del palato da un modello murino.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Dissezione del tessuto del palato da un topo adulto

Sacrificare un topo adulto C57BL/6J (maschio o femmina) mediante lussazione cervicale nel rispetto delle norme della struttura relative al benessere degli animali.
1. Rimuovere i peli intorno alla bocca con un rasoio. Usando le forbici, tagliare dalla guancia verso la mascella, da entrambi i lati.
  nota: Il topo deve essere anestetizzato prima del sacrificio. Viene utilizzata una miscela anestetica di medetomidina, midazolam e butorfanolo (vedere Tabella dei materiali).
Usa una pinza per spalancare la bocca e assorbire il sangue usando un batuffolo di cotone. Per disinfettare il palato, pulire l'interno della bocca con un batuffolo di cotone contenente il 10% di iodio povidone.
Per prelevare il palato del topo, in primo luogo, utilizzare una lama di bisturi chirurgico per praticare un'incisione marginale a tutto spessore lungo il lato del palato dei denti mascellari. Quindi, sezionare accuratamente l'intero palato utilizzando un raspatorium.
nota: Un raspatorio è uno strumento utilizzato per sollevare un lembo mucoperiostale (vedi Tabella dei materiali) (Figura 1B).
Trasferire rapidamente il tessuto del palato in una provetta da 15 mL contenente 4 mL di terreno completo + soluzione antibiotico-antimicotica. Tenere i fazzoletti sul ghiaccio fino al momento dell'incubazione.
nota: Per la raccolta da più topi, i tessuti del palato possono essere mantenuti in ghiaccio per un massimo di 4 ore.

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Risultati

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Figura 1: Panoramica della procedura di dissezione e isolamento dei cheratinociti orali di topo. (A) Rappresentazione schematica della cavità orale di topo. (B) Strumenti utilizzati per sezionare il palato e isolare i cheratinociti orali di topo. (C) Immagine in campo chiaro del palato del topo. Barra della scala: 100 μm. (D