Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Anestesia e incannulamento tracheale
- Pesare il topo per determinare il dosaggio dei farmaci anestetici, dei farmaci analgesici post-operatori e del volume corrente del ventilatore. Preriscaldare il termoforo a 37 °C. L'impostazione chirurgica è illustrata nella Figura 1.
- Iniettare nel topo per via intraperitoneale una miscela di ketamina e xilazina alla dose di 80 mg/kg e 10 mg/kg, rispettivamente.
- Rasare rapidamente il pelo del topo sulla gola e sul lato sinistro della gabbia toracica usando un rasoio elettrico.
- Controllare la profondità dell'anestesia pizzicando la coda e/o le zampe posteriori e sistemare l'animale in posizione supina sul termoforo. Metti un piccolo impacco di garza sotto la testa dell'animale per evitare il surriscaldamento degli occhi. Applicare il gel oculare per evitare la secchezza oculare.
- Fissare i quattro arti con del nastro adesivo sulla superficie del termoforo. Passare un anello di sutura di seta 5-0 sotto gli incisivi superiori e incollare l'estremità del cappio con del nastro adesivo sul termoforo. Questo manterrà la bocca dell'animale aperta e faciliterà l'incannulamento.
- Applicare la crema depilatoria sulle zone pre-rasate e massaggiare delicatamente con un batuffolo di cotone per 1 minuto. Pulire l'eccesso di pelo e crema con una garza. Utilizzare gocce di soluzione salina allo 0,9% e una garza per pulire le aree dell'incisione. Applicare pezzi di garza sterile sulla gola e sul torace rasati e immergerli in iodopovidone.
nota: Si consiglia l'applicazione di un farmaco anestetico locale (lidocaina o bupivacaina) nei siti di incisione.
- Impostare il ventilatore a un volume corrente di 7 mL/kg e una velocità di ventilazione di 140 colpi/min.
nota: D'ora in poi, lavora sotto uno stereomicroscopio per microchirurgia.
- Tenere la pelle al centro della gola ed eseguire un'incisione di 0,5 cm seguendo una linea caudale/cefalica utilizzando piccole forbici. Separare i lobi della ghiandola salivare, quindi separare delicatamente la fascia del muscolo sternoioide con una pinza da dissezione curva fino a quando la laringe e la trachea sono visibili. Fissare i bordi dell'apertura con divaricatori fissati a elastici.
nota: Fai questo passaggio senza incisione dei muscoli. Un operatore addestrato sarà in grado di intubare l'animale attraverso la cavità orale senza visualizzare la trachea, rendendo questo passaggio facoltativo.
- Tenere delicatamente la lingua lateralmente. Con una pinza, inserire l'ago interno smussato di una cannula da 16 G nella trachea. Visualizzare il corretto inserimento nella trachea attraverso l'incisione della gola.
- Collegare la cannula al ventilatore e garantire una corretta ventilazione immergendo il tubo di scarico nell'acqua. La presenza di bolle indica una corretta intubazione.
nota: Per mantenere i tessuti bagnati durante l'operazione, posizionare una garza sterile imbevuta di soluzione salina allo 0,9% e iodopovidone sull'incisione della gola. Controlla l'umidità durante la procedura.
2. Legatura dell'arteria coronaria LAD
- Rilasciare la zampa anteriore sinistra dal nastro adesivo e spostare con cautela il mouse in posizione di decubito sul lato destro. Fissare l'arto anteriore sinistro una volta che l'animale è nella posizione corretta.
- Identificare la linea tra i muscoli pettorali piccoli e maggiori sinistri e praticare un'incisione cutanea obliqua di 1 cm con le forbici seguendo la linea. Con le micro forbici smussate da dissezione, separare la fascia dei muscoli pettorali senza incisione. Mantenere i muscoli pettorali separati con divaricatori attaccati agli elastici.
- Regolare il ventilatore con una pressione positiva di fine espirazione (PEEP) di 3 cm H2O.
- Aprire la cavità toracica utilizzando una pinza smussata nel 3° spazio intercostale tra la 3° e la 4° costola. Evitare di toccare l'arteria toracica interna in quanto esiste il pericolo di sanguinamento. Non toccare il cuore o i polmoni. Applicare due divaricatori nella gabbia toracica, uno su ciascuna costola (Figura 2A).
- Con una pinza fine curva, rimuovere con cura il pericardio e separarlo senza danneggiare il cuore e i polmoni.
- Individuare l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD). L'arteria LAD appare come una linea superficiale rosso vivo che va dal bordo del padiglione auricolare sinistro verso l'apice.
- Utilizzare un porta-aghi per far passare una sutura di seta 7-0 sotto il LAD da 2 a 3 mm sotto gli atri sinistri. Tirare lentamente la seta per evitare una lacerazione del tessuto cardiaco. Legare la legatura con tre nodi. La parte inferiore sinistra del ventricolo sinistro impallidisce istantaneamente dopo la legatura (Figura 2B-E).
nota: È importante non andare troppo in profondità nella cavità ventricolare o rimanere troppo superficiali. Per gli animali con finzione, tirare la seta di sutura sotto il LAD e rimuoverla lentamente evitando lo strappo dei tessuti.
- Rilasciare i divaricatori di costole, tenere la 3a costola con una pinza ed eseguire due passaggi con una sutura di seta 6-0 sotto la 3a e la 4a costola.
cautela: Non perforare il cuore o il polmone. Non stringere ancora i nodi.
- Mettere tre gocce di soluzione salina allo 0,9% a 37 °C sull'apertura e chiudere il tubo di scarico dell'espirazione per 2 o 3 cicli respiratori per gonfiare correttamente i polmoni. Stringere la sutura e fissarla con due lanci.
- Rilascia i divaricatori che tengono i muscoli e aiutali a recuperare il loro posto corretto.
- Chiudere la pelle toracica con due punti di sutura di seta 5-0 e fissarla con due lanci. Chiudere la pelle della gola con un punto di seta di sutura 5-0 e fissarla con due lanci.
