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Articolo metodologico
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8 luglio 2025
Fonte: Smith-Page, K. et al. Isolamento commensale congiuntivale e identificazione nei topi. J. Vis. Exp. (2021)
Questo video descrive una tecnica basata su tampone per isolare batteri commensali vitali dalla congiuntiva oculare. La tecnica può essere utilizzata per profilare il microbioma batterico commensale della congiuntiva, che svolge un ruolo difensivo contro i patogeni.
Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Preparazione del tampone oculare, impostazione del campo di lavoro, tampone oculare del topo e arricchimento del campione
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Figura 1: Tampone oculare interno.
(A) Un sottile pezzo di ovatta di cotone tirato di circa 1 cm veniva tenuto tra la punta sterile dello stuzzicadenti e l'indice e lo stuzzicadenti veniva arrotolato mantenendo una leggera pressione contro l'indice fino a quando il cotone non era completamente arrotolato sulla punta dello stuzzicadenti. (B) Esempi.......
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Puntale per pipetta da 0,1 a 10 μl | Stati Uniti d'America Scientific | 1110-300 | Autoclave prima dell'uso |
| Pipetta Eppendorf da 0,5 a 10 μl | Fisher Scientifico | Codice 13-690-026 | |
| Siringa da 1 ml | Fisher Scientifico | BD309623 | 1 siringa per ogni gruppo di tampone oculare |
| Provette Eppendorf da 1,5 ml | Stati Uniti d'America Scientific | 1615-5500 | Autoclave prima dell'uso |
| Puntale per pipetta da 1000 μ ml | Stati Uniti d'America Scientific | Periodo 1111-2021 | Autoclave prima dell'uso |
| Pipetman Gilson da 200 a 1000 μl (P1000) | Fisher Scientifico | F123602G | |
| Ago da 25 g | Fisher Scientifico | 14-826AA | 1 ago per gruppo di tampone oculare |
| 3 % Perossido di idrogeno | Fisher Scientifico | Episodio 25359 | |
| Incubatore a 37 ° C | Attrezzature da laboratorio | ||
| 70 % Isopropanolo | Fisher Scientifico | PX1840-4 | |
| Iniezione Ana-Sed (Xilazina 100 mg/ml) | Santa Cruz Salute degli animali | SC-362949Rx | |
| Bruciatore Bunsen | Attrezzature da laboratorio | ||
| Asciugamani di carta puliti | Attrezzature da laboratorio | ||
| Cotone Imbatta/Cotone arrotolato sterile | CVS | ||
| Ketamina (100 mg/ml) | Henry Schein | 9950001 | |
| topi | Laboratori Jackson | C57/BL6J | |
| Piastre di Petri | Fisher Scientifico | 08-757-12 | Per Piastre di agar al sale di mannitolo |
| RPI Brain Cuore Infusion Media | Fisher Scientifico | Codice: 50-488525 | Preparare secondo le indicazioni e in autoclave |
| SteriFlip (solfone di poliestere con pori di 0,22 μm) | EMD/Millipore, Fisher Scientifc | SCGP00525 | Per sterilizzare l'anestesia |
| Gabbia per topi sterile | Attrezzature da laboratorio | ||
| Stuzzicadenti (bambù rotondo) | Elementi essenziali per la cucina | Autoclave prima dell'uso e preparazione del tampone | |
| Tritticasi Agar di Soia II con il 5% di Placche di Sangue di Pecora | Fisher Scientifico | 4321261 | Conservare a 4 °C fino al momento dell'uso |
| Collirio monouso | Farmacia CVS | Bausch e Lomb Lenithe Lubrificante Collirio, 28 fiale, 0.02 fl oz. |
