Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE
1. Impianto chirurgico del sistema di monitoraggio telemetrico della temperatura
- All'arrivo dal venditore, lasciare che gli animali riposino nel vivaio per almeno 1 settimana prima dell'intervento chirurgico per ridurre al minimo lo stress del trasporto.
- Il gruppo ospita i topi (massimo 5 per gabbia secondo le linee guida locali IACUC) fino al giorno dell'intervento per l'impianto del dispositivo telemetrico della temperatura. Ospitali in gabbie standard da 7,25" (L) x 11,75" (L) x 5" (A) contenenti lettiera di pannocchia. Mantenere il ciclo di luce su un ciclo di luce 12 x 12 (acceso: 7 AM; spento: 7 PM). Mantenere la temperatura dell'alloggiamento a 20-22 °C e l'umidità relativa (RH) al 30%-60%. Fornire la dieta standard per il cibo e l'acqua ad libitum fino al protocollo EHS.
nota: La logica per l'alloggiamento individuale è quella di evitare frequenti lesioni da combattimento nei topi maschi C57bl/6J e di fornire ampie opportunità di corsa spontanea della ruota per ciascun topo.
- Per il posizionamento dei dispositivi di telemetria, anestetizzare il topo con isoflurano (4%, 0,4-0,6 L/min di flusso di O2) in una camera di induzione. Quindi, posizionare il topo in anestesia continua tramite un cono nasale (1,5%, 0,6 L/min).
- Usa un lubrificante per gli occhi, come un unguento veterinario, per proteggere gli occhi dell'animale da danni o lesioni durante l'intervento chirurgico.
- Per preparare il sito chirurgico, radere il basso addome con un tagliacapelli per piccoli animali o utilizzare un depilatore disponibile in commercio. Somministrare la prima dose di buprenorfina per via sottocutanea (0,1 mg/kg) durante questo periodo.
- Strofinare l'area con tre lavaggi di iodio povidone (o scrub germicida simile) seguiti da un risciacquo con alcol isopropilico al 70% (o soluzione fisiologica sterile a seconda delle esigenze veterinarie locali). Quindi, trasferire il mouse nell'area chirurgica.
- Utilizzare un telo adesivo per isolare il sito chirurgico sul topo. Utilizzando strumenti sterili e tecnica asettica, praticare un'incisione di ~ 1 cm sulla linea mediana lungo la linea alba, a circa 0,5 cm dal margine costale. Quindi, separare la pelle dallo strato muscolare e praticare un'incisione leggermente più piccola sulla linea alba, facendo attenzione a non danneggiare l'intestino o gli organi interni.
- Una volta aperto lo strato muscolare, posizionare il telemetro sterile (dispositivo di radiotelemetria in miniatura riutilizzabile senza batteria; 16,5 x 6,5 mm) nella cavità intraperitoneale davanti alle arterie caudali e alle vene e dorsale agli organi digestivi per consentirgli di fluttuare liberamente><.
nota: Tutti i telemetri vengono puliti con acqua e sapone, accuratamente risciacquati e sterilizzati a gas con ossido di etilene tra un utilizzo e l'altro. Se la sterilizzazione a gas non è disponibile, è accettata l'immersione in soluzioni di sterilizzazione (seguendo le raccomandazioni del produttore per la diluizione e il tempo di immersione) per disinfettare e sterilizzare i telemetri.
- Chiudere l'apertura addominale con una sutura sterile riassorbibile 5-0 e chiudere la pelle utilizzando un semplice punto interrotto con sutura 5-0 prolina.
nota: Consentire al telemetro di fluttuare nel compartimento addominale senza legarlo alla parete addominale (un metodo raccomandato dal produttore) ha dimostrato di avere successo e preferito dagli autori per eliminare l'eccesso di tensione nella parete addominale durante la guarigione. Inoltre, ciò non ha alcun impatto sulla capacità del ricevitore di ottenere il segnale dall'emettitore.
- Posiziona il mouse nella sua gabbia pulita con un termoforo portatile sotto la gabbia. Monitorare il topo ogni 15 minuti durante la prima ora di recupero dall'anestesia, quindi tornare alla struttura di stabulazione degli animali.
