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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Laparotomia
- Anestetizzare gli animali con xilazina (10 mg/kg) e soluzione di ketamina (80 mg/kg), per via sottocutanea (0,1 ml/10 g di peso corporeo) utilizzando una siringa da 1 ml e 13 aghi da 0,45 mm da 26 G 1/2. Verificare la profondità dell'anestesia sufficiente pizzicando la punta. Controlla la temperatura corporea tramite cuscinetti riscaldati. Assicurarsi che tutti i materiali chirurgici siano sterili.
- Pulire la zona addominale con una soluzione di iodio povidone al 5% e utilizzare un rifinitore per rimuovere i peli tra il torace e il basso addome (circa 2cm2). Pulire l'area chirurgica con alcool al 70%.
- Immobilizzare l'animale sulla tavola chirurgica utilizzando del nastro chirurgico. Utilizzare le forbici per tagliare 5 mm di pelle orizzontalmente, sulla parte superiore dell'addome e 1 cm sotto il processo xifoideo. Ripetere il taglio sul peritoneo. Ciò si tradurrà in una laparotomia con esposizione minima della cavità.
2. Localizzare ed Esporre il Pancreas
- Con l'aiuto di un divaricatore, tirare il fegato verso la testa del topo, a ~1 cm dall'intestino.
- Localizzare la regione del pancreas che verrà iniettata con taurocolato di sodio (testa del pancreas). Localizzare il duodeno con riferimento al fegato, sotto il fegato, sul lato destro (a sinistra quando si guarda il topo). Il duodeno è la prima parte dell'intestino tenue ed è collegato alla porzione finale dello stomaco.
- Con l'aiuto di una pinza, sollevare il fegato verso la testa dell'animale e tirare delicatamente la parte dell'intestino tenue. Fissare le due estremità laterali dell'intestino tenue con una sutura in polipropilene 6-0 per visualizzare meglio la porzione distale del dotto biliare comune.
3. Induzione di pancreatite acuta grave
- Occludere temporaneamente il dotto biliare comune prossimale con una clip per microvasi per evitare che l'infusione retrograda fuoriesca nel fegato. Il dotto biliare comune può essere visto sul lato epatico del duodeno e la sua giunzione con il duodeno apparirà bianca. Esporre l'organo fuori dalla cavità addominale.
- Perforare la regione periampollare (parte biancastra della parete dell'intestino tenue) per accedere al dotto biliare comune con un ago da 0,4 mm collegato a un tubo di polietilene da 0,54 mm.
- Effettuare un'occlusione temporanea del dotto biliare comune distale con 8-0 sutura per evitare che la soluzione di taurocolato di sodio fuoriesca nel duodeno.
- Avviare la pompa di infusione e programmare l'infusione di una soluzione di taurocolato di sodio al 2,5% (diluita in soluzione fisiologica allo 0,9%) a una velocità costante di 10 μL/10 g di peso corporeo per 3 minuti.
- Dopo l'infusione, rimuovere la clip per microvasi, il temporaneo 8-0 sutura e l'ago per iniezione dal dotto biliare pancreatico per ricostituire il flusso fisiologico della bile.
- Al termine, sutura l'addome con sutura in polipropilene monofilamento non assorbente 6-0. Il tempo tra la laparotomia e la sutura finale dovrebbe essere di un massimo di 30 minuti (vedi Figura 1).
- Dopo l'intervento, alloggiare gli animali in scatole di polietilene rivestite con trucioli di legno e acqua e cibo ad libitum.
- Trattare i topi di controllo allo stesso modo dei topi sperimentali, ma assicurarsi che l'infuso sia costituito solo da soluzione fisiologica. Eseguire la procedura chirurgica e l'infusione di soluzione salina (10 ml/min, per 3 minuti) in un gruppo di controllo (SHAM) per eliminare il bias infiammatorio causato dalla chirurgia e dall'incannulamento.
- Utilizzare tramadolo 12,5 mg/kg per via sottocutanea ogni 8 ore, a partire dal recupero post-operatorio.
