Banding dell'arco aortico trasverso in modello murino: una tecnica minimamente invasiva nei topi per l'induzione di alta pressione nel ventricolo sinistro

In questo articolo

Abstract

Fonte: Zaw, A. M. et al. Costrizione aortica trasversa minimamente invasiva nei topi. J. Vis. Exp. (2017)

In questo video, dimostriamo un protocollo sperimentale per la costrizione aortica trasversa minimamente invasiva nei topi per esaminare l'insufficienza cardiaca indotta da sovraccarico di pressione.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione del sito operativo

Disinfettare il sito dell'operazione con alcol isopropilico al 75%. Regolare la temperatura del termoforo a 37 °C per evitare variazioni della frequenza cardiaca e respiratoria dell'animale in questione.
Utilizzare strumenti chirurgici sterilizzati in uno sterilizzatore a spostamento di gravità a 121 °C per 30 minuti o con altri metodi appropriati.
Prendi 2-4 aghi calibro 30 e curvali con un portaaghi, come mostrato nella Figura 1, per creare uno strumento per la legatura e la separazione dei tessuti e per l'uso come divaricatore. Monta l'ago ora curvo su un applicatore di cotone per l'uso in chirurgia.
Smussare un ago calibro 27 e curvarlo di 90º con il portaago. Lisciare la punta strofinando una superficie dura per creare un distanziatore di 0,4 mm nella fase di legatura.

2. Preparazione degli animali

Anestetizzare un topo maschio di 2 mesi, di 22-25 g C57BL/6N con una miscela appropriata di ketamina e xilazina in relazione al peso corporeo: 100 mg/kg + 10 mg/kg i.p. Confermare l'anestesia con il riflesso negativo del pizzicamento della coda.
Rimuovere i peli sul collo anteriore e sul torace con un'applicazione di 2 o 3 minuti di crema depilatoria. Rimuovere la crema con acqua tiepida e un applicatore di cotone.
Applicare un unguento o un gel oftalmico sugli occhi dell'animale per evitare che la cornea si secchi.
Posizionare l'animale su un termoforo in posizione supina ed eseguire il monitoraggio intraoperatorio, assicurandosi di conservare la documentazione appropriata ogni 15 minuti di intervallo.
Utilizzare del nastro di carta chirurgica per fissare gli arti al termoforo in modo da mantenere l'animale nella posizione corretta durante l'intervento.
Disinfettare la pelle alternativamente con alcool e soluzione di iodio povidone tre volte.
Utilizzare un telo sterile con un campo operatorio esposto per evitare la contaminazione. Utilizzare guanti sterili nuovi per ogni topo e se necessario.

3. Procedura di legatura

Apri la pelle del mouse nella posizione della linea mediana del collo e del torace con un bisturi.
Tirare la ghiandola tiroidea verso la testa separando delicatamente i tessuti connettivi con delle forbici smussate.
Separare lo strato muscolare sulla trachea sulla linea mediana verso entrambi i lati con gli aghi curvi.
Con le forbici smussate, tagliare lo sterno fino alla seconda costola (circa 5 mm). Aprire il taglio con un divaricatore o una pinza curva.
Separare i lobi del timo l'uno dall'altro e la parete toracica inferiore separando il tessuto connettivo con l'ago ricurvo; l'arco aortico trasverso e le due arterie carotidi saranno chiaramente visibili a questo punto.
Posizionare l'ago curvo sotto l'arco e perforare tra la parete del vaso e il tessuto connettivo sull'altro lato spingendo la testa curva verso l'esterno.
Utilizzando l'ago curvo, tirare la sutura monofilamento 6-0 sotto l'arco aortico.
Posizionare il distanziatore nell'anello e fissare la sutura in posizione con un doppio nodo. Rimuovere delicatamente il distanziatore.
Confermare una costrizione riuscita con la posizione del nodo e tagliare le estremità della sutura.
Chiudere la parete toracica utilizzando una sutura di seta 6/0 con un semplice motivo di sutura interrotto. Chiudere la pelle con una sutura monofilamento 6/0 in uno schema di sutura continuo.

4. Assistenza post-operatoria

Applicare la soluzione di iodio povidone sul sito di sutura e posizionare l'animale in una gabbia preriscaldata per il recupero e il monitoraggio post-operatorio.
Iniettare buprenorfina (0,05-0,1 mg/kg s.c. ogni 12 ore) dopo che l'animale ha ripreso conoscenza per alleviare il dolore e fornire al topo cibo morbido appropriato.
Riportare l'animale in una stanza per cicli luce/buio di 12 ore dopo il completo recupero.

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Risultati

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Figura 1: Processo di formazione degli uncini dell'ago desiderati piegando una punta dell'ago calibro 30 da 1 pollice. (A) La punta dell'ago originale da 1 pollice calibro 30. (B) Afferrare la punta dell'ago con il portaago e piegarla a circa metà della sua lunghezza. Piegare l'ago in un cappio, usando il portaago e le mani, se necessario, per form...