Recupero prenatale di embrioni di topo: una procedura per raccogliere embrioni da un topo gravido

Abstract

Source: Yun, K. Valutazione dei difetti di ostruzione della giunzione del tratto urinario mediante iniezione di colorante blu di metilene. J. Vis. Exp.(2017)

Questo video dimostra il recupero di embrioni da un topo gravido. Gli embrioni perinatali recuperati possono essere utilizzati come sistemi modello per lo studio dello sviluppo dei mammiferi.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Dissezione di embrioni prenatali

1. Pulire le forbici da dissezione e le pinze con etanolo al 70%.
2. Per raccogliere embrioni perinatali a E18.5 o E19.5, sopprimere prima i topi gravidi utilizzando l'inalazione di CO₂ e quindi eseguire la lussazione cervicale secondo le linee guida etiche.
   nota: La femmina di topo incinta di solito partorisce a partire da E18.5, tuttavia, i reni più grandi sono più facili da manipolare. Pertanto, i reni a E19.5 più vicini alla nascita sono più facili da eseguire questa analisi. Tuttavia, i cuccioli con ostruzioni bilaterali del tratto urinario muoiono dopo la nascita. A seconda delle caratteristiche dei topi sperimentali, dovrebbe essere determinato empiricamente un giorno/ora di raccolta appropriato.
3. Spruzzare etanolo al 70% sulla superficie addominale ventrale e quindi aprire la cavità addominale ventralmente utilizzando forbici da dissezione e pinze.
4. Sollevare l'intero utero e separarlo dal corpo tagliandolo con le forbici da dissezione sulla punta delle corna uterine.
5. Sciacquare l'intero utero con 1x PBS in una capsula di Petri.
6. Tagliare l'utero segmentalmente con le forbici da dissezione e rimuovere la decidua placentare con una pinza da dissezione per esporre gli embrioni nei sacchi vitellino.
7. Rimuovere prima il sacco vitellino e poi rimuovere la membrana amniotica con una pinza da dissezione per liberare gli embrioni perinatali.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Forbici da lavoro delicate	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6702
Pinze per microdissezione	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5135
Pinzette Dumont; Modello #5	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5045
Qualità Biologica Inc. SOLUZIONE SALINA NORMALE - 500ML	Fisherscientific	50-983-204