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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Preparazione dell'animale
- Iniettare analgesia 30 minuti prima dell'intervento chirurgico (4 mg/kg di carprofene e 0,1 mg/kg di buprenorfina).
- Registrare il peso corporeo del topo per regolare la dose di Rose Bengal da iniettare (10 μL/g, cioè 100 μg/g).
- Posizionare il topo nella camera di induzione con una portata di isoflurano del 4% per anestetizzarlo fino a quando il movimento spontaneo del corpo e delle vibrisse non si ferma.
- Trasferisci il mouse nella cornice stereotassica e posizionalo in posizione prona con il naso nella maschera per anestesia. Fissare l'animale e mantenere la concentrazione di isoflurano al 4% per 1 minuto. Quindi ridurre e mantenere la concentrazione di isoflurano al 2%.
- Inserire delicatamente la sonda rettale per monitorare la temperatura durante le procedure chirurgiche. Impostare il termoforo controllato dal feedback associato per mantenere la temperatura corporea del mouse a 37 °C.
- Applicare l'unguento oculare al dexpantenolo su entrambi gli occhi e pulire la pelle e il pelo circostante con un agente disinfettante.
2. Modello di fototrombosi
- Praticare un'incisione longitudinale di 2,0-2,5 cm e ritrarla per esporre il cranio. Eseguire l'esposizione del cranio con un solo taglio per evitare complicazioni della ferita.
- Rimuovere delicatamente il periostio con del cotone e identificare le suture coronali.
- Indossare gli occhiali protettivi, accendere il laser a 561 nm e contrassegnare il bregma +3 mm a sinistra.
- Spegnere il laser, applicare un adesivo con un foro di 4 mm di diametro posizionato alle coordinate contrassegnate sopra menzionate.
- Iniettare nel topo la rosa del Bengala (10 μL/g), per via intraperitoneale. Posizionare il raggio laser a 4-5 cm dal cranio, accendere il laser a 561 nm e illuminare il cranio per 20 minuti.
- Applicare due gocce di soluzione fisiologica allo 0,9% sul cranio per reidratare, suturare la ferita e posizionare l'animale in una camera di recupero a 37 °C per riprendersi dall'anestesia. Dopo 1 ora, rimetti i topi nelle loro gabbie in una stanza a temperatura controllata.
- Iniettare analgesia ogni 12 ore per 3 giorni dopo l'intervento chirurgico (4 mg/kg di carprofene e 0,1 mg/kg di buprenorfina).