Modello murino di trapianto di isole: un metodo chirurgico per infondere le isole pancreatiche nella vena porta e prevenzione del sanguinamento postoperatorio

In questo articolo

Abstract

Fonte: Gou, W. et al. Minimizzazione del sanguinamento della vena porta post-infusione durante il trapianto intraepatico di isole nei topi. J. Vis. Exp. (2021)

In questo video, descriviamo una procedura per infondere cellule delle isole pancreatiche nella vena porta epatica, seguita dall'applicazione di schiuma di gel per prevenire con successo il sanguinamento. Il sanguinamento postoperatorio è una causa comune di elevata mortalità durante il trapianto di isole.

Protocollo

1. Trapianto di isole

Indurre e mantenere il topo in anestesia generale con isoflurano al 2%. Verificare la mancanza di riflessi del pedale per garantire una corretta anestesia dell'animale.
Radersi e rimuovere il pelo nella zona dell'addome del topo.
Somministrare una singola dose preoperatoria di Buprenorfina (0,1 mg/kg i.p.).
Disinfettare l'area chirurgica con tre salviette alternate di iodio al 2% e alcol al 75%.
Eseguire una laparotomia con micro forbici per generare un'incisione di 1-1,5 cm.
Aprire la cavità peritoneale con un divaricatore. Seguire il metodo A o il metodo B come descritto di seguito.

Metodo A: (fermare l'emorragia con schiuma di gel, Figura 1A)

Preparazione del mouse
1. Metti una garza sterile attorno all'incisione.
2. Estrarre delicatamente l'intestino con una pinza e tenerlo sulla garza.
3. Identificare la vena porta in base alla sua posizione ed esporla bene.
4. Coprire l'intestino con una garza calda e salata durante l'intero intervento chirurgico.
Inserire l'ago della siringa da insulina precaricata attraverso la vena porta vicino al duodeno (Figura 1B). Per fare ciò, tenere l'ago con il foro (smusso) rivolto verso il basso e posizionare l'angolo della superficie di apertura parallelamente alla parete della vena porta prima di penetrare attraverso la parete.
1. Tirare lo stantuffo per aspirare un po' di sangue (20-50 μL) nella siringa per mescolare prima le isole.
2. Infondere lentamente le isole nella vena porta, tirando e spingendo ripetutamente il tuffo.
3. Posizionare un pezzo di schiuma gel (di circa 0,5 cm x 0,5 cm) per coprire il sito di iniezione.
4. Premere la schiuma di gel verso il basso con una punta di cotone mentre si estrae l'ago dalla vena porta.
5. Continua a premere sul gel per circa 2 minuti per confermare che non ci sia sanguinamento attivo.
6. Arrotolare la punta di cotone sopra e lontano dalla schiuma di gel per assicurarsi che la schiuma di gel copra bene la vena porta.

Metodo B: (fermare l'emorragia con il cuscinetto adiposo, Figura 1C)

Esporre accuratamente la vena porta.
1. Usa due punte di cotone per tenere la vena porta esposta sia dal lato sinistro che da quello destro.
2. Identificare il cuscinetto di tessuto adiposo tra il duodeno e la vena porta.
3. Penetrare attraverso il cuscinetto adiposo prima di inserire l'ago nella vena porta (Figura 1D).
4. Infondere le isole, seguendo la procedura simile descritta sopra nel Metodo A.
5. Estrarre l'ago premendo sul grasso con una punta di cotone.
6. Continua a premere sul cuscinetto adiposo per 1 minuto dopo aver rimosso l'ago.
Dopo aver confermato che non vi è sanguinamento dalla vena porta, riportare delicatamente l'intestino nella cavità peritoneale nella sua posizione originale.
Lasciare 0,5 mL di soluzione salina calda (36-37 °C) nella cavità addominale prima della chiusura.
nota: La soluzione salina calda facilita il movimento e il recupero dell'intestino post-operatorio e previene la necrosi intestinale.
Chiudere lo strato muscolare con una sutura 5-0.
Chiudere lo strato cutaneo con una sutura 4-0.
Posiziona il mouse in una gabbia pulita su un termoforo fino a quando non si riprende completamente dall'anestesia.
Continuare a fornire un analgesico (ad es. buprenorfina 0,1 mg/kg i.p.) ogni 12 ore e calore supplementare per 48 ore dopo l'intervento.
NOTA: La procedura di trapianto di isole richiede circa 15-20 minuti per essere completata.

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Risultati

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Figura 1: Illustrazione delle procedure di trapianto intraepatico di isole netrule.(A, C). Schemi dei passaggi chiave utilizzati nel Metodo A e nel Metodo B. (B, D). Le isole sono state iniettate direttamente attraverso la vena porta (C) o indirettamente tramite fat pat (D).