Installazione della finestra di imaging intravitale pancreatico in un modello murino: una finestra di imaging pancreatico integrata per l'imaging in vivo time-lapse della microstruttura del pancreas murino

Abstract

Fonte: Park, I. et. al. Visualizzazione longitudinale stabilizzata a livello cellulare in vivo del pancreas in un modello murino con una finestra di imaging intravitale pancreatico. J. Vis. Exp. (2021)

Questo video mostra la procedura per impiantare una finestra di imaging pancreatico per separare il pancreas dall'intestino per l'imaging longitudinale ad alta risoluzione time-lapse della microstruttura del pancreas.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Chirurgia

1. Preparare una piattaforma chirurgica sterile e sterilizzare le superfici con etanolo al 70%.|
   nota: Per le sessioni di imaging longitudinale, la tecnica asettica è essenziale.
2. Anestetizzare i topi con una miscela di tiletamina/zolazepam (30 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg).
   nota: Si raccomanda l'uso di tiletamina/zolazepam al posto della ketamina a causa del suo effetto avverso dell'iperglicemia. L'anestesia ottimale deve essere selezionata ai fini dell'esperimento.
3. Monitorare la temperatura corporea utilizzando una sonda rettale con un termoforo a controllo omeoremico.
4. Radere il fianco sinistro del topo e applicare tre cicli di scrub alternati a base di alcol e iodio.
   nota: Se si utilizza la crema depilatoria, non lasciare più di 1 minuto per evitare ustioni chimiche.
5. Praticare un'incisione di 1,5 cm sul fianco sinistro del topo e sezionare la pelle e il muscolo.
6. Eseguire una sutura con cordino della borsa con una sutura nera o in nylon 4-0 nel margine dell'incisione.
7. Utilizzare un micro divaricatore sull'incisione ed esporre delicatamente la milza.
8. Raggruppare con cura la milza con una pinza ad anello e identificare il pancreas.
9. Posiziona la finestra sul fianco del topo e passa la milza e il pancreas attraverso lo spazio aperto della finestra. La manipolazione del pancreas deve essere molto delicata in quanto può causare sanguinamento o pancreatite.
   nota: Progettare su misura la finestra di imaging intravitale del pancreas per isolare il pancreas dall'intestino nella cavità addominale (Figura 1A, B).
10. Posizionare delicatamente il pancreas sulla piastra della finestra di imaging; la milza verrà posizionata sullo spazio aperto della finestra.
11. Applicare gocce di colla cianoacrilato N-butilico sul margine della finestra di imaging.
    1. Per ridurre al minimo la quantità di colla applicata, utilizzare un ago per catetere da 31 G per l'applicazione. Se la quantità di goccia è grande, il fazzoletto aderirà involontariamente alla finestra o al vetro di copertura.
12. Applicare delicatamente un vetro di copertura rotondo da 12 mm sul margine della finestra di imaging.
13. Tirare l'anello di sutura per inserirlo nella scanalatura laterale della finestra e legarlo tre volte.
14. Taglia il sito prossimale massimale del nodo per evitare l'interruzione dei punti stretti quando questi topi sono svegli.
15. Lascia che i topi si riprendano dall'anestesia (2-3 ore) e inietti ketoprofene (5 mg/kg, per via sottocutanea nella pelle flaccida alla base del collo o dell'anca dell'animale) per alleviare il dolore. Rivalutare i segni di dolore ogni 12 ore e il ketoprofene deve essere preso in considerazione ogni 24 ore per 1-3 giorni.
    nota: L'analgesia influenza la secrezione di insulina in risposta al glucosio. La scelta e la tempistica dell'analgesia devono essere individualizzate allo scopo sperimentale.
16. Sistemare il mouse nella gabbia con una lettiera sufficiente per evitare il contatto della finestra con la gabbia. Evita di alloggiare la casa con i topi senza l'intervento chirurgico alla finestra.

Risultati

Figura 1. Disegno e fotografia della finestra di imaging intravitale pancreatico. (A) Una vista 3D e in sezione trasversale della finestra di imaging intravitale pancreatico. (B) Fotografia anteriore e posteriore della finestra di imaging pancreatico.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Copribicchieri circolare	Marienfeld	Codice 111520	Vetro di copertura per finestra per imaging pancreatico
Forbice IRIS	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	S-1107-10	Questo prodotto può essere sostituito con il prodotto di un'altra azienda
Loctite 401	Henkel	401	Colla cianoacrilato N-butile
Micro Porta aghi	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	H-1126-10	Questo prodotto può essere sostituito con il prodotto di un'altra azienda
Micro dittatore	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Codice: 17004-03	Questo prodotto può essere sostituito con il prodotto di un'altra azienda
Micropinze	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1034	Questo prodotto può essere sostituito con il prodotto di un'altra azienda
Nylon 4-0	AILEE	NB434	Sutura non assorbibile
Omnican N 100 30G	B BRAUN	FT9172220S	Per il catetere vascolare, utilizzare solo la parte dell'ago
Finestra di imaging pancreatico	Geumto Engineering	Ordine personalizzato	Finestra di imaging pancreatico - ordine personalizzato
Physiosuite	Kent Scientifico	PS-02	Regolatore di temperatura omeotermico
Pinze ad anello	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1090-3	Questo prodotto può essere sostituito con il prodotto di un'altra azienda
Rompun	Bayer	Rompun	Agente anestetico
Zoletil	Virbac	Zoletil 100	Agente anestetico
BALB/C Nudo	OrientBio	BALB/C Nudo	BALB/C Nudo