Analisi del volume dei linfonodi inguinali di topo: una tecnica di imaging a ultrasuoni ad altissima frequenza per determinare il volume dei linfonodi inguinali nel modello murino

Abstract

Fonte: Vitiello, M. et. al., Analisi del volume dei linfonodi mediante imaging ecografico ad altissima frequenza nel modello murino geneticamente modificato di Braf/Pten di melanoma. J. Vis. Exp. (2021)

In questo video, dimostriamo la tecnica per visualizzare il linfonodo inguinale in un modello murino utilizzando l'imaging a ultrasuoni ad altissima frequenza. Questa tecnica di imaging non invasiva consente di monitorare la variazione del volume dei linfonodi nell'animale nel tempo.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Procedura di imaging

1. Posizionare il topo in una camera di induzione per l'anestesia gassosa e fornire isoflurano al 3% in ossigeno puro fino a quando l'animale non è completamente anestetizzato. Verificare la profondità dell'anestesia in base alla mancanza di risposta al pizzicamento della zampa.
2. Trasferire l'animale su una tavola riscaldata, parte costitutiva della stazione di imaging UHFUS, mantenendo l'animale in posizione supina. Utilizzare una sonda rettale lubrificata con vaselina per misurare la temperatura corporea. Regolare la temperatura della tavola per mantenere la temperatura corporea del mouse nell'intervallo fisiologico (36 ± 1°C).
3. Inumidire gli occhi del topo con un unguento veterinario per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Fornire gas narcotico (1,5% di isoflurano in ossigeno puro) attraverso una maschera nasale di topo. Regolare la percentuale di isoflurano per mantenere la corretta profondità dell'anestesia.
4. Rivestire le zampe anteriori e posteriori con pasta conduttiva e fissarle con nastro adesivo agli elettrodi della piastra ECG incorporati nella scheda. Verificare che i parametri fisiologici (frequenza cardiaca, segnale respiratorio e temperatura corporea interna) siano correttamente acquisiti e visualizzati.
5. Rimuovere i peli da entrambe le aree inguinali applicando un agente depilatorio e rivestirli con un mezzo di accoppiamento acustico.
6. Bloccare la sonda lineare UHFUS (frequenza centrale di 40 MHz) in un motore 3D specializzato incorporato nella stazione di imaging UHFUS, consentendo il movimento automatizzato e graduale della sonda.
7. Orientare e regolare correttamente la posizione della sonda ecografica per ottenere immagini dell'asse corto del linfonodo inguinale (sinistra/destra) e posizionare la regione di interesse nella zona focale.
8. Scansiona l'intero volume del linfonodo inguinale come una sequenza di immagini 2D B-mode, come descritto in precedenza. Acquisizione di immagini a più livelli del linfonodo mediante movimento lineare del trasduttore con dimensioni dei passi su scala micrometrica, per generare dati 3D in termini di loop cine con respirazione automatica e cardiogate.
9. Impostare la registrazione dell'immagine con i seguenti parametri: distanza di scansione compresa tra 2 e 5 mm (a seconda delle dimensioni dei linfonodi); dimensione del passo 44 μm, con un risultato di 46-114 passi di scansione/fette di linfonodi e un tempo di acquisizione di 1-3 minuti per animale. Memorizza digitalmente le immagini acquisite in formato grezzo (DICOM) per ulteriori analisi offline.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
B6. Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) topi	Il laboratorio Jackson	Codice: 13590
Blu gel	Sooft Ialia		Gel per soluzione oftalmica
IsoFlo (isoflorano)	Zoetis		Liquido per anestesia gassosa
Sigma gel	Parker		Gel per elettrodi
Gel transonico trasparente	Telic SAU		Gel per ultrasuoni
Veet	Reckitt Benckiser IT		Crema depilatoria
Sistema compatto a doppia anestesia	Fujifilm, Visualsonics Inc.		Sistema per anestesia a base di isoflurano dotato di cono nasale e camera di induzione
MX550S	Fujifilm, Visualsonics Inc.		Sonda lineare UHFUS
Vevo 3100	Fujifilm, Visualsonics Inc.		Sistema UHFUS
Stazione di imaging Vevo	Fujifilm, Visualsonics Inc.		Stazione di imaging UHFUS e unità di monitoraggio fisiologico avanzato dotate di scheda riscaldata
Vevo Lab	Fujifilm, Visualsonics Inc.		Piattaforma software per la post-elaborazione delle immagini ecografiche