Estrazione della coppa retinica dal topo: una procedura chirurgica per ottenere una coppa retinica intatta dall'occhio del topo

Abstract

Fonte: Jiang, K. et al. Determinazione della respirazione mitocondriale e della glicolisi in campioni di tessuto retinico ex vivo. J. Vis. Exp (2021)

Questo video descrive un protocollo per isolare la coppa retinica senza gli strati di copertura esterni dal bulbo oculare di un topo. Il tessuto retinico estratto può aiutare a studiare varie vie metaboliche che si verificano nelle cellule retiniche.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Dissezione della coppa retinica

1. Eutanasia di un topo per asfissia da CO₂ seguendo le linee guida istituzionali sull'eutanasia.
   nota: Non lasciare l'animale in una camera di CO₂ più a lungo del tempo necessario per l'eutanasia.
2. Enucleare gli occhi e metterli in un tampone PBS 1x vecchio come ghiaccio in una capsula di Petri e poi metterlo sotto un microscopio da dissezione.
3. Rimuovere con cura, tagliando con microforbici, i muscoli retti extra attaccati all'esterno del bulbo oculare e tagliare il nervo ottico.
4. Utilizzare un ago da 30 G per praticare un foro sul bordo della cornea (limbus); questo serve come sito di inserimento per le microforbici. Quindi, utilizzare una microforbice per dissezione fine per eseguire un taglio circolare lungo il bordo della cornea, separandola dalla conchiglia oculare posteriore.
5. Usa una pinza da dissezione affilata per rimuovere la cornea, il cristallino e l'umor vitreo dalla conchiglia oculare.
6. Usa le microforbici per la dissezione fine per fare diversi piccoli tagli sullo strato sclerale sul bordo della conchiglia oculare. Evitare di tagliare lo strato di retina. Utilizzare due pinze da dissezione affilate per trattenere il tessuto sclerale su ciascun lato del taglio e tirare con molta attenzione lo strato sclerale per rimuoverlo dalla retina neurale. Ripetere l'operazione intorno all'oculare fino a quando tutta la sclera non viene rimossa e si ottiene un coppe retinico intatto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
1X PBS	Thermo Fisher	Codice 14190-144
Ago calibro 30	Scivolamento di precisione BD	305106
Perforatore per biopsia, 1 mm	Integra Miltex	33-31AA
Camera per asfissia CO2
Pinza da dissezione-Dumont #5	Strumenti per la scienza	Codice 11251-10	Punta dritta
Pinza per dissezione-Dumont #7	Strumenti per la scienza	Codice 11274-20	Punta curva
Microscopio di dissezione
Pinza Graefe	Strumenti per la scienza	Codice 11051-10	Punta curva e seghettata
Microforbici	Strumenti per la scienza	Codice: 15004-08	Punta curva