Modello murino neonatale di resezione apicale: una procedura chirurgica per amputare l'apice ventricolare per studiare il potenziale rigenerativo in un cuore di topo neonato

Abstract

Fonte: Li, Y. et al. Trapianto di macrofagi cardiaci di topo neonatale in topi adulti. J. Vis. Exp. (2021).

In questo video, dimostriamo la procedura per rimuovere chirurgicamente l'apice ventricolare sinistro di un cuore di topo neonatale.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Operazione di resezione apicale in topo neonatale Cx3cr1 ^GFP/+ di 1 giorno (sfondo C57BL/6)

1. anestesia
   1. Togli tutti i cuccioli di topo dalle gabbie e mettili in una scatola pulita e asciutta.
   2. Immergi ogni topo nel ghiaccio per circa 2-3 minuti. Assicurati che ci sia una barriera sottile come lattice o garza tra il ghiaccio e il cucciolo di topo per prevenire il congelamento.
   3. Identificare un'anestesia sufficiente osservando i seguenti segni: pelle pallida, mancanza di movimento degli arti e mancanza di riflesso del pedale.
2. Thoracotomy
   1. Preraffreddare la piattaforma operativa in bronzo durante la notte a -20 °C per facilitare il mantenimento dell'anestesia.
   2. Estrarre il topo anestetizzato dalla ghiacciaia e posizionarlo su una piattaforma operativa in bronzo. Ancorare il mouse sulla piattaforma operativa in posizione supina utilizzando del nastro adesivo medicale.
   3. Metti la piattaforma operativa con il mouse su di essa sotto uno stereoscopio.
   4. Disinfettare il torace del mouse utilizzando un tampone imbevuto di betadina e alcol al 70% o come coerente con la politica istituzionale.
   5. Incidere la pelle con un taglio di 1 cm nella quarta area intercostale della cavità toracica e quindi separare i muscoli intercostali utilizzando le forbici microchirurgiche fino all'accesso al cuore.
   6. Premere alternativamente il torace e l'addome con l'aiuto di due pinze fino a quando il cuore non viene esteriorizzato fuori dal torace senza alcun danno meccanico.
   7. Posiziona le costole sotto e sopra la piccola incisione come fissazione naturale per immobilizzare il cuore.
3. Resezione dell'apice ventricolare
   1. Individua l'apice del ventricolo sinistro. Tagliare un diametro di 1 mm di tessuto dell'apice ventricolare usando le forbici per iridectomia sotto uno stereoscopio.
   2. Verificare che la camera ventricolare sinistra sia esposta e iniziare a trasudare.
   3. Premere delicatamente il cuore verso la cavità toracica utilizzando un batuffolo di cotone.
   4. Sutura i muscoli, le costole e la pelle usando 8-0 Suture in prolene.
   5. Pulisci accuratamente il mouse dopo l'operazione.
4. Assistenza post-operatoria
   1. Trasferire il mouse dalla piattaforma operativa a una coperta riscaldante a 37 °C per riscaldare il corpo subito dopo l'operazione.
   2. Confermare l'anabiosi del topo osservando i seguenti segni: ripristino spontaneo della respirazione, cambiamento del colore della pelle da pallido a rosa e movimento degli arti.
   3. Riporta il mouse utilizzato da sua madre una volta che si è ripreso.
   4. Se necessario, mescola il topo utilizzato con i materiali di nidificazione di sua madre.
      nota: È importante rimuovere tutti i cuccioli di 1 giorno dalla madre in una sola volta e poi restituirli tutti in una volta dopo che tutti i cuccioli sono stati recuperati.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Kit di dissociazione cardiaca neonatale	Miltenyi Bio Tech, Teterow, Germania	130-098-373