Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Interruzione chirurgica dei linfatici della coda di topo
- Utilizzare topi C57BL/6 di otto settimane di uguale distribuzione per genere.
- Mettere un topo in anestesia generale in una camera di induzione con isoflurano al 3-4% in ossigeno al 100% seguito da sedazione di mantenimento all'1-3% durante la procedura.
- Somministrare 0,5 mg/kg di buprenorfina a rilascio prolungato (SR) per via sottocutanea per il controllo del dolore.
nota: Ulteriori farmaci analgesici somministrati dopop: Carprofene una volta ogni 24 ore per almeno 48 ore e Bupivacaina una volta dopo l'incisione o prima di chiudere l'incisione, applicato gocciolando sui bordi della pelle (dura fino a 4 – 6 ore).
- Posiziona il topo dorsalmente e prepara la coda con alcol isopropilico al 70%.
- Misurare il diametro della coda prima della procedura con incrementi di 5 mm, iniziando da 20 mm dalla base della coda utilizzando un calibro. Queste misurazioni verranno utilizzate per calcolare il volume utilizzando l'equazione del tronco di cono.
- Segnare un'escissione circonferenziale di 3 mm sulla coda a 20 mm dalla base.
- Eseguire una meticolosa escissione cutanea a tutto spessore di 3 mm con una lama chirurgica sterile (misura 15), lasciando intatta tutta la vascolarizzazione sottostante sotto ingrandimento microscopico chirurgico. Incidere il segno circonferenziale superiore (20 mm dalla base della coda) prima attraverso il derma, seguito da un'incisione circonferenziale a tutto spessore a 3 mm distalmente alla prima incisione
- Praticare un'incisione verticale perpendicolare a tutto spessore per collegare le due incisioni. Usa un pick-up dentato fine per afferrare un bordo d'attacco e usa le microforbici per sezionare con cura in profondità all'interno del piano avascolare fino al derma e in superficie fino all'avventizia venosa.
- Iniettare 0,1 mL di blu isosulfan (1%) per via sottocutanea prossimale alla punta della coda.
- Identificare i due canali linfatici adiacenti alle vene laterali della coda al microscopio operatorio. I linfatici appariranno blu a causa dell'iniezione di isosulfan. Sezionare i linfatici usando le forbici microchirurgiche dritte. Usa le forbici per sezionare con cura un piano tra la vena laterale e il linfatico. Quindi passare la punta di una lama di forbice tra il vaso linfatico e la vena laterale e chiudere le lame per sezionare il vaso linfatico.
- Vestire la ferita della coda con una medicazione trasparente aderente sterile. Controlla quotidianamente le incisioni post-operatorie per assicurarti che non siano infette o sanguinanti e fornisci cure alle ferite per 2 settimane.
- Alloggiare gli animali singolarmente per evitare ulteriori lesioni alla coda e per evitare che gli animali si mordano a vicenda, il che porterebbe a complicazioni chirurgiche.
