Sonda laser Doppler di posizionamento: una tecnica per impiantare una sonda sull'arteria cerebrale media per la misurazione del flusso sanguigno in un modello murino

Abstract

Source: Llovera, G., et al. Modellazione dell'ictus nei topi: occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media attraverso l'arteria carotide esterna. (2021).

Questo video descrive la procedura chirurgica per immobilizzare la sonda laser Doppler sull'arteria cerebrale media del cervello murino, o MCA. La sonda aiuta a misurare il flusso sanguigno nella microvascolarizzazione del cervello misurando lo spostamento Doppler causato dal movimento dei globuli rossi all'interno dell'arteria.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione e posizionamento del laser Doppler

1. Preparare un supporto per la sonda laser Doppler tagliando la punta di una punta per pipetta da 10 μL (lunghezza 3-5 mm).
   nota: Tutti gli strumenti vengono sterilizzati utilizzando uno sterilizzatore a microsfere calde. Le superfici vengono inoltre disinfettate prima e dopo l'intervento chirurgico con uno spray disinfettante microbico. Prima dell'intervento chirurgico, le aree che circondano la testa e il torace dei topi vengono disinfettate con uno spray disinfettante per la disinfezione delle ferite.
2. Iniettare analgesia nel topo 30 minuti prima dell'intervento chirurgico (4 mg/kg di carprofene e 0,1 mg/kg di buprenorfina, per via intraperitoneale).
3. Anestetizzare il topo posizionandolo nella camera di induzione con una velocità di flusso di isoflurano del 4% fino alla cessazione del movimento spontaneo del corpo e delle vibrisse.
4. Posizionare il mouse in posizione prona nell'area operatoria con il naso nella maschera per anestesia. Mantenere la concentrazione di isoflurano al 4% per un altro minuto, quindi ridurla e mantenerla al 2%.
5. Impostare il cuscinetto riscaldante controllato dal feedback associato per mantenere la temperatura corporea del mouse a 37 °C e inserire delicatamente la sonda rettale per monitorare la temperatura durante le procedure chirurgiche.
6. Applicare l'unguento per gli occhi al dexpantenolo su entrambi gli occhi.
7. Disinfettare la pelle e i peli che circondano l'occhio sinistro e l'orecchio con etanolo al 70%.
8. Taglia il cuoio capelluto tra l'orecchio sinistro e l'occhio (lungo 1 cm) per esporre l'osso del cranio.
9. Taglia e ritira il muscolo temporale per visualizzare l'MCA sotto il cranio.
10. Fissare con la colla la parte esterna della punta tenendo la sonda/fibra laser Doppler sopra l'MCA sinistro con la colla. Quindi, incollare la pelle per chiudere la ferita attorno al supporto della punta. Applicare 2-3 gocce di colla indurente per accelerare il processo. Assicurarsi che la fibra laser Doppler non sia incollata e possa essere facilmente rimossa dal supporto della punta in qualsiasi momento.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Rampa a 45°	H&S Kunststofftechnik		Altezza: 18 cm
Siringa da 5 ml	Braun
Sistema di anestesia per isoflurano	Drager
Pomata di bepanthen	Bayer
Topi C57Bl/6J	Fiume Carlo	000664
Etanolo 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
Etanolo 96%	CLN Chemikalien Laborbedorf	522078
Etanolo 99%	CLN Chemikalien Laborbedorf	ETO-5000-99-1
Filamenti	Dott.	Codice 602112PK5Re
Fine 45 pinze angolate	FST	Codice 11251-35
Pinze fini	FST	Codice 11252-23
Forbici fini	FST	Codice 14094-11
colla	Orechseln	BSI-112
Colla indurente	Drechseln & Mehr	BSI-151
Coperta riscaldante	Regolatore di temperatura CC FHC
Isoflurano	abate	B506
Laser Doppler	Perimed	PF 5010 LDPM, sistema Periflux 5000
Sonda laser Doppler	Perimed	91-00123