Modellazione dell'occlusione tracheale fetale transuterina in modello murino: una procedura chirurgica per la legatura della trachea fetale all'interno di un topo gravido

Abstract

Fonte: Aydın, E. et al. Modello di occlusione tracheale fetale transuterina nei topi. J. Vis. Exp. (2021)

Questo video dimostra la procedura di occlusione tracheale transuterina di un feto di topo in un topo gravido. Questo modello può essere utilizzato per studiare l'impatto della trachea occlusa sullo sviluppo polmonare.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Laparotomia

1. Pulire la superficie addominale con alcool e iodio povidone. Mantenere le condizioni di sterilità durante l'operazione.
2. Eseguire un'incisione verticale per la laparotomia delle madri gravide. Taglia tutti gli strati separatamente.
3. Identifica le corna uterine su ciascun lato.
4. Determinare i feti candidati per l'intervento chirurgico.
   nota: Non operare sui feti che sono più vicini alla vagina.
5. Operare su due feti in ogni corno uterino se c'è un numero pari di feti su ciascun lato (4 la maggior parte delle volte) e su 1 feto in ogni corno uterino se c'è un numero dispari dell'utero (3 la maggior parte delle volte).

2. Occlusione tracheale (TO)

1. Utilizzare occhiali con ingrandimento 2,5x per la visualizzazione.
2. Posizionare il corno uterino in modo trasversale.
3. Prendi i cuccioli, rivolti verso l'alto, tra due dita usando gli occhi dei cuccioli e la coda come guida per posizionare il feto.
4. Applicare una leggera pressione sulla testa del cucciolo per consentire l'estensione della testa e quindi la visualizzazione del collo.
5. Utilizzare una sutura in polipropilene 6.0 con un ago atraumatico per eseguire l'TO (Figura 1). Tenere la placenta lateralmente e lontano dai punti di entrata e di uscita dell'ago.
6. Inserire l'ago trasversalmente attraverso il lato dell'utero lontano dalla placenta attraverso la parte anteriore di 1/3 del collo.
7. Muovi delicatamente l'ago fino alla linea mediana del collo e dirigilo verso la parte anteriore, quindi esci dal collo tra la trachea e di fronte alla guaina carotidea e all'utero.
8. Annodare la sutura, avendo cura di mantenere l'integrità delle membrane e della parete uterina, e mantenere il cordone ombelicale al sicuro durante l'annodatura.

3. Chiusura della parete addominale

1. Sostituire il corno uterino nell'addome.
2. Iniettare 2 mL di soluzione fisiologica sterile calda nella cavità peritoneale prima della chiusura.
3. Metti una sutura in poliglactina 5/0 per chiudere la parete addominale e chiudi la pelle con una sutura di seta non corrente.
4. Applicare 0,1 mg/kg di buprenorfina per via intraperitoneale per analgesia e consentire il recupero della madre in un'incubatrice calda.

Risultati

Figura 1. Occlusione tracheale. (A) La sutura transuterina che passa attraverso il collo. (B) Rappresentazione schematica delle strutture dopo il passaggio della sutura e prima del nodo. Abbreviazioni: C = Arteria carotide; J = Vena giugulare; T = Trachea; E = Esofago; V = Vertebra.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Buprenorfina	Par Farmaceutico	NDC 42023-179-05	Per anestesia regionale
Occhiali d'ingrandimento	USA Medico-Chirurgico	SLR-250LBLK	Almeno 2,5x
Sutura in seta	Ethicon	VCP682G	4-0, 24 mm, taglio
Isoflurano	Halocarbon Life Sciences NDC	Codice 66794-017-25	Per anestesia regionale
Sutura in polipropilene	Ethicon	Y432H	6-0, 13 mm 1/2c Punto conico