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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Colonscopia e induzione della ferita
- Preassemblare i componenti dell'endoscopio inserendo prima l'endoscopio con foro rigido da 1,9 mm nella guaina (Figura 1A-B). Collegare la pompa dell'aria (per fornire l'insufflazione del colon) utilizzando il tubo in dotazione, alla valvola del gas sul lato sinistro della guaina accanto al canale di lavoro (Figura 1C).
nota: Sebbene l'obiettivo qui descritto sia 0°, a questo scopo può essere utilizzato anche un obiettivo da 30°.
- Assicurarsi che il canale di lavoro sia in posizione aperta e inserire una pinza per biopsia da 3 Fr attraverso il canale di lavoro e farla avanzare fino all'estremità della guaina (assicurandosi che non sporga dalla guaina) (Figura 1C). Collegare l'endoscopio assemblato alla sorgente luminosa e al dispositivo di imaging video secondo le istruzioni del produttore.
- Anestetizzare il topo con isoflurano al 5% con ossigeno in una camera di induzione. Quindi spostare il topo su una piattaforma di stadiazione endoscopica contenente un sistema di riscaldamento (per prevenire l'ipotermia) sul lato ventrale e mantenere in anestesia utilizzando un cono nasale con isoflurano al 2% con ossigeno. Aggiungi un unguento veterinario agli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Assicurarsi che il mouse sia completamente anestetizzato pizzicando delicatamente il piede posteriore per verificare la presenza di un riflesso.
nota: Qualsiasi ceppo o sesso di topi può essere utilizzato con questa tecnica; Tuttavia, è preferibile che i topi abbiano almeno 8 settimane di età, quindi sono abbastanza grandi per la procedura.
- Aggiungi un unguento veterinario agli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia.
- Assicurarsi che il mouse sia completamente anestetizzato pizzicando delicatamente il piede posteriore per verificare la presenza di un riflesso.
- Riempire una siringa da 3 ml con un ago per sonda di ratto attaccato con soluzione fisiologica tamponata con fosfato a temperatura ambiente (PBS). Inserire l'ago a circa 1 cm nell'ano del topo e infondere delicatamente PBS per pulire il materiale fecale. Diversi pellet fecali dovrebbero uscire dal topo insieme al PBS che è stato infuso.
nota: L'instillazione di un volume eccessivo di PBS può provocare la formazione di schiuma nel lume che potrebbe oscurare la visione del lume.
- Inserire l'endoscopio assemblato di 0,5 cm nell'ano del topo. Far avanzare la pinza per biopsia nel lume del retto fino a quando le "mascelle" complete (compresa la cerniera) della pinza si trovano oltre l'estremità della guaina (come osservato sul monitor video). Ruotare la pinza di 90° in modo che le ganasce si aprano con orientamento est-ovest.
- Per la biopsia, aprire la pinza e avanzare di circa 1 cm, chiudere la pinza e con un movimento fluido tirare rapidamente indietro la pinza lasciandola chiusa.
- Evitare di insufflare completamente il colon durante l'esecuzione della biopsia. Pertanto, lasciare aperto il lato destro della valvola del gas durante questo passaggio; Anche se va notato che all'apertura del forcipe c'è il rischio di danneggiare la mucosa quando il colon è in questa posizione.
