Articolo metodologico

Modello di ferita murina guidato da colonscopia: un metodo per isolare il letto della ferita indotta da biopsia dal colon per comprendere il processo di guarigione

8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Montrose, DC, et al. Esecuzione di biopsie a pizzico guidate da colonscopia nei topi e valutazione dei successivi cambiamenti tissutali. J. Vis. Exp. (2021).

In questo video, descriviamo una procedura per isolare il letto della ferita indotto dalla colonscopia in un momento appropriato per un'analisi molecolare dettagliata. Questa analisi aiuta a comprendere il processo di guarigione delle ferite in condizioni infiammatorie del tratto gastrointestinale.

Protocollo

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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Raccolta del letto della ferita per l'analisi molecolare

  1. Eutanasia del topo utilizzando l'asfissia da CO2 seguita da lussazione cervicale (o tecnica equivalente) il giorno selezionato dopo la biopsia.
  2. Raccogli la regione distale del colon aprendo la pelle e il muscolo addominale per esporre la cavità corporea. Posiziona le forbici chiuse sotto il colon e sollevalo delicatamente per liberarlo dal mesentere sottostante, quindi taglia il colon nel suo punto medio e nell'ano per rimuoverlo dal topo.
  3. Sciacquare il contenuto fecale utilizzando un ago per sonda gastrica per ratti collegato a una siringa da 20 ml riempita con 1x PBS ghiacciato, quindi adagiare il colon su carta da filtro.
  4. Tagliare longitudinalmente il colon su carta da filtro assicurandosi che il lato mesenterico sia rivolto verso il basso contro la carta da filtro. Applicare lo 0,2% di blu di metilene sulla mucosa utilizzando una pipetta a pressione mentre il tessuto è ancora sulla carta da filtro e quindi drenare il blu di metilene in eccesso. Osserva il colon al microscopio da dissezione e individua il letto della ferita (Figura 1A).
  5. Utilizzando le micro forbici dell'iride da 4 pollici, tagliare attorno al bordo del letto della ferita (Figura 1A, cerchio tratteggiato) facendo attenzione a non tagliare lo strato muscolare (a meno che il muscolo non sia desiderato) e trasferire il letto della ferita sezionato in un tubo utilizzando una pinzetta a punta fine per il congelamento a scatto o il metodo di conservazione desiderato.
    nota: La quantità di tessuto raccolta in questo modo è sufficiente per estrarre l'RNA per l'analisi RNA-seq o equivalente.

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Risultati

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Figura 1: Immagini ex vivo e sezionate del letto della ferita. (A) Un colon è stato prelevato da un topo 2 giorni dopo la biopsia, colorato con blu di metilene allo 0,2% e sottoposto a imaging al microscopio da dissezione. Il cerchio tratteggiato indica i bordi del letto della ferita. La linea nera indica la posizione corretta per dividere in due il letto della ferita/colon prima dell'inclusione per ...

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Pinza per biopsia, 3 FrKarl StorzCodice 61071ZJ
in isofluoranoCovetrusOre 2905
blu di metileneSigma-AldrichVisualizzazione del materiale M9140
micro forbici per irideIntegra18-1619
Scalpal con lama #10Collina-RomCodice 372610

Ristampe e permessi

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Tag

Biopsia guidata da colonscopiaisolamento del letto della feritapreparazione del tessuto colonicocolorazione con blu di metileneanalisi istologicastudi sull espressione genicamicroscopia da dissezioneforbici a iride per microdissezionelavaggio con PBS

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