Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Estrazione chirurgica del blocco cardiopolmonare.
- anestesia:
- Utilizzare una combinazione di un sedativo (xilazina) e un barbiturico (pentobarbital).
nota: Diversi cocktail anestetici possono essere utilizzati senza alcun effetto sui risultati sperimentali.
- In primo luogo, sedare i conigli neozelandesi sani con una singola iniezione intramuscolare di xilazina cloridrato (3-5 mg/kg). Assicurarsi che i conigli rimangano calmi e rilassati per consentire ulteriori manipolazioni dopo alcuni minuti dall'iniezione.
- Dopo la sedazione, utilizzare le vene marginali (laterali) dell'orecchio come accesso per anestetizzare i conigli con un'iniezione endovenosa di pentobarbital sodico (28 mg/kg).
- monitoraggio:
- Per evitare un'anestesia insufficiente o un'eccessiva depressione delle funzioni cardiache e respiratorie, monitorare i seguenti parametri. Per valutare la profondità dell'anestesia, eseguire un test di pizzicamento delle dita dei piedi.
- Assicurati che la mucosa sia rosa. Le tonalità blu o grigie indicano ipossia.
- Assicurarsi che la frequenza cardiaca sia compresa tra 120 e 135 battiti/min e che la temperatura corporea non scenda sotto i 36,5 °C.
- Posizionamento degli animali:
- Radere il busto del coniglio e posizionare l'animale sul tavolo operatorio in posizione supina. Posizionare il sistema di ventilazione vicino al tavolo, dietro la testa del coniglio, per consentire il collegamento rapido della cannula dopo la tracheotomia per evitare danni tissutali.
- Incisione e tracheotomia:
- Sezionare la pelle con un'incisione della linea mediana ventrale di 3-5 cm dal diaframma fino al collo.
- Con le forbici operatorie, tagliare i 2/3 anteriori della trachea tra due anelli di cartilagine per inserire la cannula tracheale attraverso la membrana fibrosa tracheale.
- Inserire un 5 mm (diametro esterno; OD) attraverso la membrana fibrosa tracheale e utilizzare una sutura di seta 4-0 per fissarla con cura.
- Posiziona una pinza o una pinzetta sotto la trachea per assicurarti che la cannula non si pieghi contro la trachea.
