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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Preparazione degli animali
- Sedare un maiale mediante iniezione intramuscolare (i.m.) di tiletamina (3,75 mg/kg) e zolazepam (3,75 mg/kg) e dexmedetomidina (37,5 μg/kg). Aspetta che diventi incosciente.
- Preparare una linea endovenosa inserendo una cannula da 20 G nella vena dell'orecchio.
nota: Assicurarsi che la cannula sia nella vena iniettando 5-10 ml di soluzione fisiologica attraverso la cannula. Se la vena è stata persa, ciò sarà evidente da un piccolo edema nel tessuto dell'orecchio.
- Intubare il maiale per garantire che la frequenza respiratoria possa essere regolata durante l'intervento.
nota: Garantire il successo dell'intubazione applicando pressione sul torace del maiale e confermare che l'aria espirata forzatamente esca dal tubo di intubazione.
- Collegare il tubo di intubazione a un ventilatore impostato su una frequenza respiratoria di 14 respiri/min.
- Collegare un pulsossimetro e un bracciale alla coda per monitorare la frequenza cardiaca (FC), la pressione sanguigna (BP) e la saturazione di ossigeno (sats). Inserire un termometro rettale per monitorare la temperatura interna.
- Preparare una sacca per flebo di ketamina (5 mg/kg/min), midazolam (0,25 mg/kg/min) e fentanil (2,5 μg/kg/min), in soluzione salina e iniziare a infondere attraverso la vena auricolare a circa 2 gocce/s.
nota: Durante l'intervento chirurgico, potrebbe essere necessario aumentare o diminuire la velocità di infusione in base ai parametri vitali dell'animale.
- Con il maiale in posizione prona, palpare la parte posteriore della testa e del collo dell'animale per individuare e segnare la cresta occipitale e la colonna vertebrale delle prime vertebre toraciche e la base di ciascun orecchio.
- Tracciare una linea retta tra la cresta e le vertebre lungo l'asse longitudinale. Disegna due linee dalla cresta alla base di ciascun orecchio seguendo la base del cranio (Figura 1A).
- Controlla che l'animale sia in un sonno profondo stringendo con cura la coda e osservando l'assenza di un riflesso della coda.
nota: Se l'animale è ancora riflesso, la velocità di infusione dell'anestetico deve essere aumentata in modo incrementale fino a quando l'animale non mostra più un riflesso.
2. Chirurgia
NOTA: Durante tutto l'intervento chirurgico, è necessario avere almeno un assistente per aspirare il sanguinamento leggero e cauterizzare eventuali vasi recisi.
- Usando un bisturi con una lama # 21, praticare un'incisione dermica lungo la linea longitudinale fino al muscolo.
- Estendere due incisioni dermiche perpendicolari più lungo le spalle, lunghe 10-15 cm.
- Dalle creste occipitali, praticare incisioni dermiche lungo la linea fino alla base di ciascun orecchio.
- Afferrando gli angoli cutanei formati sulla cresta occipitale con una pinza anatomica, separare accuratamente la pelle dal muscolo sottostante facendo scorrere leggermente la lama del bisturi sulla fascia, passando dal rostrale alla caudale. Una volta che la pelle è stata resecata dopo ciascuna delle cinque incisioni, parti dei muscoli del trapezio dovrebbero essere visibili.
- Praticare un'incisione longitudinale con il bisturi, profonda circa 1 cm, dove il trapezio si unisce alla linea mediana.
nota: Quando si tagliano i muscoli, c'è una maggiore propensione al sanguinamento, quindi il cauterizzatore dovrebbe essere pronto. Se un vaso più grande viene reciso, una persona dovrebbe comprimerlo rapidamente con la garza, mentre l'altra persona usa il cauterizzatore.
- Utilizzando una combinazione di pinze chirurgiche diritte e curve, eseguire la dissezione smussata lavorando lungo il taglio longitudinale nei muscoli. Questo separerà il ventre del trapezio, così come il muscolo semispinale capitus biventer sottostante.
- Recidere le fibre muscolari persistenti con un bisturi e continuare la dissezione smussata fino a quando il complesso semispinale del capo diventa visibile.
- Recidere le origini del trapezio e dei muscoli semispinali del capo del bivacco lungo la faccia posteriore del cranio. Separarli accuratamente longitudinalmente con il bisturi eseguendo la dissezione smussata fino a quando il complesso semispinale del capo è completamente visibile.
- Ritrarre i muscoli trapezio e semispinale del capo bivacco utilizzando divaricatori autotrattenenti.
- Dove i ventri del semispinale del complesso del capo si uniscono nella linea mediana, praticare un'incisione longitudinale con il bisturi profonda circa 1 cm.
nota: Fai attenzione a qualsiasi ulteriore sanguinamento qui. Il sanguinamento può essere gestito utilizzando una combinazione di tamponi di cotone e cauterizzazione.
- Utilizzando una pinza chirurgica, eseguire una dissezione smussata lavorando lungo il taglio longitudinale tra i ventri muscolari fino a quando l'aspetto dorsale dell'atlante (CI) è palpabile.
- Recidere le origini dei muscoli semispinali del complesso capitus lungo la faccia posteriore del cranio e separarlo longitudinalmente dalle vertebre sottostanti mediante bisturi e dissezione smussata.
- Ritrarre i muscoli del complesso semispinale del capo utilizzando un'altra serie di divaricatori autotrattenibili.
- Utilizzando un bisturi, rimuovere con cura il tessuto rimanente sovrastante la regione in cui l'atlante incontra la base del cranio.
- Mettendo un braccio sotto il collo dell'animale e un dito alla giunzione tra l'atlante e il cranio, solleva contemporaneamente la testa e fletti il collo mentre palpa con il dito per rivelare la cisterna magna usando l'altra mano><.
nota: La cisterna magna è riconoscibile quando palpa come una forte struttura elastica con una piccola quantità di rimbalzo quando la pressione viene rilasciata con il dito.
