Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Per consentire ai conigli di acclimatarsi nei sistemi di contenzione e allo sperimentatore di confermare oggettivamente la stabilizzazione delle frequenze cardiorespiratorie, strumentare tutti i conigli con i sensori cardiorespiratori e neuronali ed eseguire un monitoraggio video continuo per > 1 ora, 1 - 3 volte per animale.
2. Esperimento di farmaci per via endovenosa (Pentylenetetrazol, PTZ)
- Per visualizzare la vena marginale dell'orecchio, radere la superficie posteriore dell'orecchio del coniglio. Utilizzare una salvietta con etanolo al 70% per disinfettare il sito e dilatare la vena marginale dell'orecchio. Ciò è indicato dall'ovale tratteggiato nero nella Figura 1F.
- A questo punto, chiedi a uno sperimentatore di coprire il muso del coniglio con la mano per ridurre lo stress della procedura per il coniglio. Un secondo sperimentatore incannula accuratamente la vena marginale dell'orecchio con un anetetere sterile da 25 G.
- Una volta che il catetere è nella vena, posizionare un tappo di iniezione sterile all'estremità del catetere in modo che un ago possa introdurre il farmaco per via endovenosa. La posizione del tappo di iniezione è indicata da un cerchio blu nella Figura 1G.
- Crea una stecca avvolgendo una garza da 4 x 4 pollici con del nastro adesivo in modo che formi una forma a tubo e posizionandola all'interno dell'orecchio del coniglio. Quindi fissare la stecca all'orecchio in modo che il catetere sia fissato in posizione e rimanga in posizione verticale, in modo simile all'orecchio non cateterizzato.
- Iniettare 1 mL di 10 unità USP per mL di soluzione salina eparinizzata.
nota: Il catetere e il vaso devono essere visibilmente ripuliti dall'aria e rimanere pervi. Se il catetere non è nel vaso, la siringa non spingerà facilmente e ci sarà un accumulo di soluzione salina nel tessuto sottocutaneo.
- Somministrare ai conigli dosi incrementali di PTZ per via endovenosa da 1 mg/kg a 10 mg/kg con incrementi di 1 mg/kg ogni 10 minuti. Prendere nota all'inizio di ogni dose per indicare quale animale viene iniettato e la concentrazione del farmaco.
nota: Ciò consente di valutare gli effetti acuti e additivi della somministrazione di PTZ. In alternativa, per valutare ulteriormente gli effetti cronici di PTZ a basse dosi, al coniglio vengono somministrate dosi ripetute ad ogni concentrazione di basso dosaggio, 7 dosi a 2 mg/kg, 3 dosi a 5 mg/kg, quindi 3 dosi a 10 mg/kg, ogni dose viene separata da 10 minuti.
- Dopo ogni dose, monitorare attentamente il video-EEG-ECG-capnografia-ossimetria per eventuali anomalie elettriche e respiratorie neuro-cardiache e evidenza visiva di attività epilettiforme. Si notino queste modifiche in tempo reale e durante la post-analisi.
nota: L'attività convulsiva inizia spesso entro 60 secondi dalla somministrazione di PTZ.
