Monitoraggio multisistemico delle anomalie epilettiche nel coniglio: un metodo per la registrazione simultanea di video EEG, ECG, capnografia e ossimetria durante le convulsioni indotte

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Per consentire ai conigli di acclimatarsi nei sistemi di contenzione e allo sperimentatore di confermare oggettivamente la stabilizzazione delle frequenze cardiorespiratorie, strumentare tutti i conigli con i sensori cardiorespiratori e neuronali ed eseguire un monitoraggio video continuo per > 1 ora, 1 - 3 volte per animale.

2. Esperimento di farmaci per via endovenosa (Pentylenetetrazol, PTZ)

1. Per visualizzare la vena marginale dell'orecchio, radere la superficie posteriore dell'orecchio del coniglio. Utilizzare una salvietta con etanolo al 70% per disinfettare il sito e dilatare la vena marginale dell'orecchio. Ciò è indicato dall'ovale tratteggiato nero nella Figura 1F.
2. A questo punto, chiedi a uno sperimentatore di coprire il muso del coniglio con la mano per ridurre lo stress della procedura per il coniglio. Un secondo sperimentatore incannula accuratamente la vena marginale dell'orecchio con un anetetere sterile da 25 G.
3. Una volta che il catetere è nella vena, posizionare un tappo di iniezione sterile all'estremità del catetere in modo che un ago possa introdurre il farmaco per via endovenosa. La posizione del tappo di iniezione è indicata da un cerchio blu nella Figura 1G.
4. Crea una stecca avvolgendo una garza da 4 x 4 pollici con del nastro adesivo in modo che formi una forma a tubo e posizionandola all'interno dell'orecchio del coniglio. Quindi fissare la stecca all'orecchio in modo che il catetere sia fissato in posizione e rimanga in posizione verticale, in modo simile all'orecchio non cateterizzato.
5. Iniettare 1 mL di 10 unità USP per mL di soluzione salina eparinizzata.
   nota: Il catetere e il vaso devono essere visibilmente ripuliti dall'aria e rimanere pervi. Se il catetere non è nel vaso, la siringa non spingerà facilmente e ci sarà un accumulo di soluzione salina nel tessuto sottocutaneo.
6. Somministrare ai conigli dosi incrementali di PTZ per via endovenosa da 1 mg/kg a 10 mg/kg con incrementi di 1 mg/kg ogni 10 minuti. Prendere nota all'inizio di ogni dose per indicare quale animale viene iniettato e la concentrazione del farmaco.
   nota: Ciò consente di valutare gli effetti acuti e additivi della somministrazione di PTZ. In alternativa, per valutare ulteriormente gli effetti cronici di PTZ a basse dosi, al coniglio vengono somministrate dosi ripetute ad ogni concentrazione di basso dosaggio, 7 dosi a 2 mg/kg, 3 dosi a 5 mg/kg, quindi 3 dosi a 10 mg/kg, ogni dose viene separata da 10 minuti.
7. Dopo ogni dose, monitorare attentamente il video-EEG-ECG-capnografia-ossimetria per eventuali anomalie elettriche e respiratorie neuro-cardiache e evidenza visiva di attività epilettiforme. Si notino queste modifiche in tempo reale e durante la post-analisi.
   nota: L'attività convulsiva inizia spesso entro 60 secondi dalla somministrazione di PTZ.

Figura 1: Coniglio collegato all'apparecchiatura.(A) Posizione degli elettrodi ECG, il braccio sinistro è indicato da un punto giallo. Il braccio destro è indicato da un punto bianco. La gamba sinistra è indicata da un punto rosso. Il terreno anteriore alla gamba destra è indicato da un punto verde. (B) Coniglio in contenzione con elettrodi ECG ed EEG collegati. C) Novellame di coniglio in un sistema di contenzione con opportune modifiche per accogliere un coniglio più piccolo, compreso un rialzo sotto il coniglio, schiuma per il collo e tubo in PVC tagliato. (D) Coniglio in contenzione con posizione degli elettrodi EEG. Il frontale destro è indicato da un punto arancione. Il frontale sinistro è indicato da un punto rosso. L'occipitale destro è indicato da un punto giallo. L'occipitale sinistro è indicato da un punto blu. La referenza è indicata da un punto nero. (E) Coniglio in contentore con stimolatore fotico e configurazione della cabina a specchio. La sorgente luminosa è indicata da un punto bianco. (F) Vena marginale dell'orecchio dopo che l'orecchio del coniglio è stato rasato e asciugato con alcool. (G) Coniglio con un atleta saldamente fissato nella vena dell'orecchio marginale sinistro. Il sito del tappo di iniezione è indicato con un punto blu. (H) Coniglio con maschera facciale attaccata al tubo della capnografia da un raccordo a T che contiene una valvola unidirezionale. (I) Schema della maschera facciale e del raccordo a T collegati al tubo per capnografia. Durante l'inspirazione, l'aria ambiente può entrare nel raccordo a T attraverso una valvola unidirezionale (freccia verde). Durante l'espirazione, il CO2 lascia il raccordo a T entrando nel tubo per capnografia (freccia gialla). A causa della piccola quantità di spazio morto, pochissima CO2 viene trattenuta nel raccordo a T ed è generalmente inferiore a 5 mmHg.