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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Accessi intravascolari
NOTA: Gli accessi intravascolari devono essere stabiliti nella vena giugulare esterna destra, nella vena giugulare esterna sinistra, nell'arteria carotide sinistra, nell'arteria femorale sinistra e nella vena femorale destra. Nel maiale, la vena giugulare esterna è molto più grande della vena giugulare interna e, quindi, di più facile accesso. Tutti i materiali necessari per questa sezione sono mostrati nella Figura 1A.
- Radere l'animale nei siti di puntura per gli accessi intravascolari.
- Disinfettare la pelle con clorexidina (o iodio povidone) e pulire con alcol isopropilico. Ripetere per altri due cicli.
- Posizionare un telo sterile nell'area disinfettata con un foro centrale nel coperchio.
- Utilizzare un dispositivo a ultrasuoni con una sonda lineare. Coprire la sonda con un coperchio sterile e utilizzare gel sterile per l'esame vascolare.
- Utilizzare un catetere venoso sterile da 17 G per perforare la pelle e guidare l'ago verso il posizionamento intravascolare mediante ultrasuoni (Figura 1B, C).
- Sostituire l'ago con un filo guida utilizzando la tecnica di Seldinger. Rimuovere il catetere venoso lasciando solo il filo guida nel lume intravascolare. Successivamente, praticare una piccola incisione cutanea (~5 mm) aderente al filo guida per facilitare l'inserimento della guaina.
- Posizionare una guaina francese (F) da 8 sopra il filo guida e nel recipiente scelto (la tecnica di Seldinger). Scegliere una guaina 8F nella vena giugulare esterna destra (per il cateterismo cardiaco destro) e nell'arteria carotide sinistra (per il catetere ad ansa PV LV). È necessario un lume sufficiente per evitare di danneggiare i cateteri.
- Posizionare una guaina 7F nella vena giugulare esterna sinistra.
- Posizionare una guaina 7F nell'arteria femorale sinistra. L'accesso è per la misurazione invasiva della pressione sanguigna e il campionamento dei gas ematici.
- Posizionare una guaina 12F (o 14F se disponibile) nella vena femorale destra per l'inserimento del palloncino della vena cava inferiore (IVC). Prendi in considerazione l'utilizzo di un dilatatore in un approccio in due fasi per le guaine più grandi.
- Confermare e controllare il posizionamento di tutte le guaine prelevando sangue (venoso o arterioso, rispettivamente) e lavando facilmente con soluzione salina isotonica. Le guaine sono posizionate correttamente all'interno di un vaso sanguigno se si può prelevare il sangue senza resistenza.
- Fissare tutte le guaine con una sutura cutanea (misura 3.0) per evitare la rimozione accidentale di una guaina. Le suture cutanee verranno rimosse dopo il completamento del protocollo insieme alla rimozione delle guaine.
- Collegare l'accesso arterioso femorale al trasduttore di pressione e calibrare la pressione atmosferica. Assicurarsi che questa configurazione generi la forma corretta della curva della pressione arteriosa.
- Prelevare un campione di sangue arterioso da una guaina arteriosa e analizzarlo su un dispositivo di campionamento del sangue arterioso per valutare il pH, la pressione parziale arteriosa di anidride carbonica (PaCO2) e ossigeno (PaO2, a seconda del FiO2 scelto), nonché i livelli di emoglobina, elettroliti, glucosio nel sangue e lattato.
- Correggere gli elettroliti e la glicemia, se necessario, ai valori standard mediante infusione del prodotto necessario. In particolare, si consideri la correzione dei livelli di potassio in quanto i disturbi del potassio possono aumentare il rischio di aritmogenesi innescata dalla strumentazione.
- Se il suino era a digiuno prima dell'esperimento, prendere in considerazione l'infusione in bolo di soluzione salina isotonica (10 ml/kg infusi in 30-60 minuti) o cristalloidi simili per contrastare l'ipovolemia.
- Prendere in considerazione un'infusione continua di soluzione salina isotonica di 4 ml/kg/h per contrastare la sudorazione durante tutto il protocollo.
NOTA: l'esperimento può essere messo in pausa in questo passaggio.
2. Cateterismo cardiaco destro
- Lavare un catetere Swan Ganz con soluzione fisiologica e assicurarsi che il palloncino si gonfi correttamente.
- Collegare le porte del catetere Swan Ganz ai trasduttori di pressione. Reimpostare la pressione alla pressione atmosferica mantenendo le due porte di pressione (rispettivamente per la pressione arteriosa polmonare e la pressione venosa centrale) a livello medio-ascellare del maiale.
- Inserire il catetere Swan Ganz attraverso la guaina 8F nella vena giugulare destra.
ATTENZIONE: Ogni volta che si utilizza la fluoroscopia, è necessario indossare grembiuli di piombo o protezioni simili.
- Osservare in fluoroscopia quando la parte distale del catetere Swan Ganz è fuori dalla guaina. Gonfiare il palloncino con la siringa associata.
NOTA: Il gonfiaggio del palloncino Swan Ganz all'interno della guaina danneggerà il palloncino. La visione antero-posteriore della fluoroscopia è sufficiente per tutte le procedure descritte.
- Far avanzare lentamente il catetere Swan Ganz seguendo i suoi movimenti in fluoroscopia. Avanzamenti più lenti consentiranno al flusso sanguigno di guidare il catetere.
- Osservare le variazioni del segnale di pressione dalla porta distale quando entra nel ventricolo destro e poco dopo l'arteria polmonare (Figura 2). Assicurarsi che il catetere avanzi senza alcuna resistenza.
- Assicurarsi che la pressione cambi da 5-8 mmHg nella circolazione venosa centrale a 20-30 mmHg nella sistole e 0-5 mmHg in diastole nel ventricolo destro. Dopo aver superato le valvole polmonari, la pressione diastolica sarà di 10-15 mmHg (vedere la Figura 2 per i cambiamenti nelle forme del segnale di pressione).
NOTA: Pressioni sistoliche nel ventricolo destro e nell'arteria polmonare superiori a 40 (o una pressione arteriosa polmonare media superiore a 25) potrebbero essere un segno di ipertensione polmonare dovuta a infezione polmonare nell'animale. Si ricorda che la ventilazione meccanica a pressione positiva può anche aumentare la pressione arteriosa polmonare.
- Sgonfiare il palloncino e assicurarsi che la porta di pressione distale sia ancora nell'arteria polmonare principale. Utilizzare sia la fluoroscopia che il segnale di pressione per questa verifica.
