Modello di cornea suina ex vivo di cheratite batterica: una tecnica per stabilire l'infezione batterica nelle cellule epiteliali corneali

Abstract

Fonte: Okurowska, K., et al. Stabilire un modello di cornea suina ex vivo per lo studio di trattamenti farmacologici contro la cheratite batterica. J. Vis. Exp (2020).

Questo video descrive un protocollo per impostare un modello ex vivo per la cheratite batterica utilizzando un bottone corneosclerale sezionato dall'occhio suino. I batteri inoculati attraversano le incisioni epiteliali corneali per invadere lo stroma sottostante e stabilire un'infezione all'interno dei tessuti corneali che imita l'infezione in vivo.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE

1. Preparazione di un inoculo

1. Versare 10 ml di brodo LB in un pallone conico da 50 ml con un tappo di schiuma.
2. Trasferire una colonia di P. aeruginosa ceppo PAO1 o PA14 da una piastra di agar fresca e incubare a 37 °C per 3-4 ore fino a quando i batteri non sono in fase di metà logaritmica.
3. Trasferire la coltura batterica in una provetta da 50 mL e centrifugare a 3.000 x g per 5 minuti. Rimuovere il surnatante e risos....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Provetta Falcon da 50 mL	Sls	Codice 352070
Amfotericina B	sigma	Codice: A2942
Piastra a 12 pozzetti Cellstar	Greiner Bio-One	Codice 665180
Destrano	sigma	31425-100mg-F
Distribuzione	Fisher Scientifico	12899357
DMEM + glutamax	Sls	D0819
Incubatrice a doppio forno	Sls	OVe1020	Forno di sterilizzazione
Fattore di crescita epidermico	Sls	E5036-200UG
F12 PROSCIUTTO	sigma	N4888
Siero fetale per vitelli	Labtech Internazionale	CA-115/500
forcipe	Fisher Scientifico	15307805
Heracell VIOS 160i	Termo Scientifico	15373212	Incubatore per coltura tissutale
Insulina umana ricombinante	Sls	91077C-1G
LB agar	sigma	L2897
Multitron	Infors	Non applicabile	Incubatore batterico
Pbs	Sls	P4417
Penicillina-Streptomicina	Sls	P0781
Petri	Fisher Scientifico	12664785
piastra Petri 35x10mm CytoOne	Laboratorio stellare	CC7672-3340
Iodio povidone	Farmacia Weldricks	2122828
Sicuro 2020	Fisher Scientifico	1284804	Cabina di sicurezza per microbiologia di classe II
Lama per bisturi numero 15	Fisher Scientifico	O305
Bisturi Swann Morton	Fisher Scientifico	11849002