Modello di biofilm di polmone di maiale ex vivo: una tecnica per sviluppare un modello polmonare per studiare i biofilm batterici su tessuto bronchiolare di maiale

Abstract

Fonte: Harrington, N.E. et al., Test di efficacia degli antibiotici in un modello ex vivo di biofilm di Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus nel polmone della fibrosi cistica. J. Vis. Exp. (2021).

Questo video descrive il protocollo per lo sviluppo di un modello di biofilm batterico di polmone di maiale ex vivo su tessuto bronchiolare infetto. I biofilm sono aggregati batterici incorporati in una matrice aderente a una superficie. Questo modello viene utilizzato per studiare la suscettibilità agli antibiotici dei batteri in diverse fasi della formazione del biofilm.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Dissezione e infezione del tessuto polmonare di maiale ex vivo (EVPL)

1. Preparare l'SCFM per l'uso con il tessuto EVPL, seguire la ricetta per 1 L di SCFM modificato fornita nella Tabella 1.
2. Prima della dissezione, preparare una o più piastre di agar del ceppo batterico o dei ceppi batterici necessari per l'infezione utilizzando qualsiasi agar standard in laboratorio per P. aeruginosa/S. aureus (ad esempio, b....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Siringhe da insulina - 0,5 mL con ago da 29 G collegato.	VWR	BDAM324892
Piastre di coltura a 24 pozzetti
etanolo al 70% o simile per la sterilizzazione superficiale e la fiammatura delle apparecchiature di dissezione
Piastre di agar per preparare striature di P. aeruginosa/S. aureus (qualsiasi mezzo adatto)
agarosio
Foglio di alluminio - pre-sterilizzato in autoclave - per coprire il tagliere su cui si sezionano i polmoni.
Membrana di tenuta traspirante o traspirante per piastre multipozzetto	Biotecnologie diversificate	BEM-1 o BERM-2000
Bruciatore Bunsen
Tagliere - si consiglia un tagliere di plastica per consentire una facile decontaminazione con alcol.
Coolbox per il trasporto dei polmoni in laboratorio
Forbici da dissezione in diverse misure
Eagle medium modificato di Dulbecco (DMEM)
Coltello per pallet grande
Lamette da barba montate
Piastre di Petri
Tagliere in plastica e foglio di alluminio per creare una superficie di dissezione sterile e pulibile
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medio
Scfm			Ingredienti come elencati nella Tabella 1
Selezione delle pinze (si consigliano punte smussate)
Contenitori adatti per lo smaltimento di oggetti taglienti contaminati e tessuto polmonare di maiale, secondo le del vostro istituto politiche di salute e sicurezza.