Coltura del segmento oculare anteriore: un metodo per coltivare la cornea con segmento anteriore dell'occhio suino

Abstract

Fonte: Boice, E. N., Snider, E. J. Piattaforma di coltura d'organo del segmento anteriore per il monitoraggio delle lesioni del globo aperto e delle prestazioni terapeutiche. J. Vis. Exp. (2021).

In questo video, dimostriamo il metodo di coltura di un segmento dell'occhio anteriore con cornea da un occhio suino. Questo sistema di coltura funge da modello sperimentale per studiare le lesioni agli occhi.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Impostazione dei segmenti anteriori nelle piastre per coltura d'organo

1. Posizionare un singolo segmento anteriore (AS) in una piastra di Petri con AS capovolto (coppa verso l'alto). Usando un batuffolo di cotone, bagnare il mezzo e tamponare delicatamente al centro della cornea per rimuovere il pigmento. Usando una pinza per tenere l'occhio e lo stesso tampone, strofina il batuffolo di cotone attorno alla sclera per rimuovere il pigmento in eccesso.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
10-32 Spina diritta in policarbonato, connettore per tubo filettato maschio	McMaster-Carr	Codice: 51525K431
10-32 Vite a brugola, 1/2"	McMaster-Carr	Codice 92196A269
Siringa da 10 ml	Bd	302995
Siringa da 20 ml	Bd	Codice 302830
Anti-Anti	Gibco	Codice 15240-096
Chiave a L con estremità sferica	McMaster-Carr	Codice: 5020A25
Tubi BD Intramedic PE 160	Fisher Scientifico	14-170-12E
Tamponi di cotone	puritano	25-8061WC
Supporti DMEM	ATCC	30-2002
FBS	ATCC	30-2020
Pinze fini	Strumenti di precisione mondiali	Codice: 15914
Glutamax	Gibco	Codice 35050-061
O-ring in silicone per alte temperature, larghezza 2 mm, diametro interno 4 mm	McMaster-Carr	Codice: 5233T47
Chiodo (oggetto da puntura)	McMaster-Carr	Codice 97808A503
Filtri per siringhe in nylon	pescatore	09-719C
Pbs	Gibco	Codice 10010-023
Rubinetto in policarbonato, a tre vie, con luer lock maschio	pescatore	NC9593742
Ago di erogazione in acciaio inossidabile 18 G con angolo di 90 gradi	McMaster-Carr	Codice: 75165A81
Ago di erogazione dritto da 1/2" in acciaio inox 18 G	McMaster-Carr	Codice: 75165A675