Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Preparazione degli animali
NOTA: Vengono iniettate le porzioni del sistema della ghiandola lacrimale orbitale.
- Sedare i conigli con acepromazina 0,2 mg/kg per via sottocutanea.
- Tagliare il pelo nella zona periorbitale e del cuoio capelluto e rimuovere completamente eventuali residui di pelo utilizzando Nair. Lasciare la pelle completamente liscia per una migliore visualizzazione dei segni anatomici e l'iniezione ecoguidata di concanavalina A (Figura 1).
- Indurre una sedazione moderata come descritto sopra.
2. Iniezione della ghiandola lacrimale orbitale superiore (OSLG)
NOTA: OSLG segue in rapida successione.
- Applicare una pressione mediale sul globo facendo sporgere l'OSLG dall'incisione posteriore. Applicare una pressione mediale sul globo (Figura 2, freccia rossa) con la protuberanza dell'OSLG dall'incisione posteriore. La protuberanza funge da localizzazione grossolana per trovare l'incisione posteriore.
- Usa una pinza curva con le punte chiuse per rientrare l'area fino a quando non si avverte l'apertura ossea nel cranio. Questo sarà simile a una fessura con una direzione anteriore/posteriore sotto la protuberanza.
- Applicare una pressione modesta con una pinza per lasciare una rientranza nella pelle, che fungerà da punto di riferimento per il posizionamento dell'ago (Figura 3A).
- Inserire un ago (siringa di tubercolina con un ago da 27 gauge, 5/8 di pollice) perpendicolare alla pelle sopra il segno di rientranza (Figura 3B) ~ 1/4 di pollice nell'incisura, quindi reindirizzare l'ago posteriormente ed esternamente verso il canto laterale mirando al punto medio tra il sito di iniezione e il bordo orbitale osseo.
nota: Se l'incisione non viene mirata con precisione con l'ago, il cranio ne blocca l'avanzamento.
- Una volta raggiunto il mozzo dell'ago, iniettare lentamente 1000 μg di Con A in un volume di 0,2 mL (Figura 3C).
- Completa l'iniezione sia del PSLG che dell'OSLG entro 2-3 minuti
- Rimuovere l'animale dalla sedazione con isoflurano (se non ancora eseguita). L'iniezione della ghiandola lacrimale inferiore (ILG) di solito può essere completata senza ulteriore sedazione.
