Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Impianto di tumore al fegato tramite laparotomia
- Preparare il coniglio ricevente per la laparotomia. Anestetizzare il coniglio ricevente utilizzando 45 mg/kg di ketamina e 5 mg/kg di xilazina per l'induzione, seguita da intubazione e mantenimento con isoflurano all'1%-3%, se necessario. Quando il coniglio è anestetizzato, radere il sito chirurgico utilizzando un tagliacapelli. Pulire l'area dell'incisione utilizzando un lavaggio triplicato con scrub betadine, una soluzione di etanolo al 70% e una soluzione di betadina e drappeggiare l'addome in modo chirurgico sterile.
- Usando una lama #15, inizia la laparotomia praticando una piccola incisione verticale della linea mediana verso il basso attraverso la pelle del coniglio a partire dal processo xifoideo. Questo dovrebbe essere facilmente palpato e tende ad avere all'incirca le dimensioni di un penny americano. Vedere la Figura 1.
- Rispecchia la pelle e identifica la linea alba. Questa dovrebbe essere una banda bianca riflettente di tessuto che viaggia inferiormente nella linea mediana. Utilizzare la dissezione smussata per attraversare la linea alba ed esporre il peritoneo. Vedere la Figura 2.
nota: Il peritoneo è facilmente identificabile poiché sarà direttamente sovrastante l'intestino, che può essere visto muoversi con la respirazione><.
cautela: Il peritoneo tende ad essere aderente all'intestino sottostante a causa della tensione superficiale. L'uso di traumi contusivi per sezionare la linea alba aiuta a dissipare il rischio di perforazione dell'intestino sottostante.
- Una volta che il peritoneo è esposto, sezionarlo con cura per entrare nella cavità peritoneale. Il fegato può ora essere identificato. Per navigare meglio nello spazio addominale, estendere l'incisione della linea mediana di 1\u20122 cm inferiormente attraverso la pelle, i muscoli e il peritoneo.
nota: L'estensione dell'incisione della linea mediana può essere eseguita in modo semplice e sicuro inserendo con cura un emostatico curvo nello spazio peritoneale con la punta curva rivolta superficialmente verso il peritoneo. Quindi aprire leggermente l'emostatico e utilizzare una lama per tagliare il tessuto tra i due bracci dell'emostato.
- Identificare il lobo sinistro del fegato al fine di selezionare un sito per l'impianto del tumore. Il lobo sinistro è infero-laterale al lobo mediale che si trova nella linea mediana.
- Prima di tentare di estrarre il fegato dallo spazio peritoneale, posizionare un pezzo di garza asciutto sulla parte inferiore dell'incisione><.
nota: La garza fornirà una superficie aderente su cui appoggiare il fegato per evitare che si ritragga nell'addome.
- Usando una pinza atraumatica o un pezzo di garza bagnata sulle dita, estrai con cura il lobo sinistro del fegato dall'addome attraverso l'incisione e stendilo sulla garza asciutta posizionata in precedenza. Vedere la Figura 3.
cautela: La capsula epatica è sensibile e può rompersi facilmente. È fondamentale essere delicati quando si maneggia questo organo per prevenire sanguinamento capsulare, lividi epatici e/o eventuale emoperitoneo><.
nota: Di solito, il fegato si dichiarerà visivamente entrando nello spazio peritoneale; Tuttavia, se lo stomaco del coniglio è dilatato, il fegato può essere spinto cranialmente fuori dalla vista. In questo caso, sollevare delicatamente la parete addominale utilizzando una sonda smussata. In questo scenario, il fegato tende ad aderire all'aspetto ventrale del diaframma a causa della tensione superficiale, quindi separare attentamente il fegato usando una sonda smussata e dovrebbe staccarsi. Quindi usa una pinza atraumatica per estrarre il fegato.
- A questo punto, prepara il tessuto tumorale per l'impianto e posiziona un pezzo di garza bagnata sul fegato per proteggerlo.
- Selezionare un pezzo di tessuto tumorale pre-processato di 1\u20122 mm3 per l'impianto nel fegato. Vedere la Figura 4.
- Utilizzando una lama #11, perforare il tessuto epatico con un angolo di 45° creando una tasca profonda 0,5 cm, facendo attenzione a non penetrare nell'aspetto dorsale della capsula epatica. Lasciare la lama in posizione dopo aver effettuato la foratura. Vedere la Figura 5.
- Sollevare delicatamente la lama in direzione ventrale per creare una piccola tasca nel letto epatico. Prendi il pezzo di tumore usando una pinza, posiziona il pezzo di tumore in questa tasca e poi rimuovi la lama.
nota: La lama può essere rimossa prima di inserire il pezzo di tumore, tuttavia, il fegato sanguinerà e questo può oscurare il sito di puntura rendendolo difficile da identificare><.
cautela: Assicurati di ridurre al minimo il contatto del tumore con qualsiasi altra struttura per prevenire l'inseminazione involontaria del tumore. Questo può essere evitato anche mettendo da parte tutti gli strumenti utilizzati per facilitare l'impianto in seguito.
- A questo punto, posizionare un pezzo di agente emostatico, come la schiuma di gel, sulla tasca del tumore per favorire l'emostasi e prevenire l'espulsione del pezzo di tumore.
- Riportare il fegato nell'addome, una volta confermata l'emostasi.
- Chiudere la parete addominale con sutura 3-0 in polidiossanone su un ago conico utilizzando un semplice punto continuo e chiudere la pelle con suture 4-0 in poliglactina 910 su un ago da taglio utilizzando un punto sottocuticolare continuo.
cautela: Quando si chiude la parete addominale, fare attenzione a non danneggiare l'omento o altre strutture intestinali in un lancio di sutura.
