Prelievo di cartilagine articolare dalle articolazioni di un donatore equino: una procedura chirurgica per isolare il tessuto connettivo vascolare dalle articolazioni cadaveriche di un donatore equino

In questo articolo

Abstract

Fonte: Benders, K. E. M. et al. Fabbricazione di scaffold di matrice derivati da cartilagine decellularizzata. J. Vis. Exp. (2019)

In questo video, dimostriamo l'estrazione della cartilagine articolare da un'articolazione cadaverica equina. La cartilagine articolare isolata può essere utilizzata per ulteriori analisi a valle.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE

1. Prelievo di Cartilagine Articolare da Articolazioni Donatrici (Cadaveriche)

Prima della fase di raccolta, preparare 1 litro di soluzione per il lavaggio della cartilagine, costituita da soluzione salina sterile tamponata con fosfato (PBS), integrata con 100 U/mL di penicillina, 100 μg/mL di streptomicina e 1% (v/v) di amfotericina B.
Indossare guanti e camice da laboratorio durante l'intera procedura di prelievo, poiché il donatore può trasportare agenti patogeni.
Ottenere un'articolazione intatta (cadaverica) per l'isolamento della cartilagine.
nota: A questo punto, la pelle intorno all'articolazione è ancora intatta. In questo protocollo è stata utilizzata la cartilagine del ginocchio equino ottenuta dal cavallo, ma possono essere utilizzate anche altre articolazioni di altre specie.
Rimuovere la pelle che si trova intorno all'area articolare di interesse utilizzando un bisturi e una pinzetta chirurgica. Inoltre, rimuovere il grasso e il tessuto muscolare in eccesso, se necessario, senza danneggiare l'articolazione sottostante. Facoltativamente, trasferire il cadavere preparato in una cabina di sicurezza biologica.
Per eseguire un'artrotomia, cioè una separazione dell'articolazione, definire prima la posizione in cui l'articolazione si articola eseguendo l'estensione e la flessione dell'articolazione.
Rimuovere con cura più strati di grasso, muscoli e tendini con un bisturi e una pinzetta chirurgica per aprire l'area articolare.
Praticare un'incisione per raggiungere la cavità articolare.
nota: La cavità articolare è riempita con liquido sinoviale, che può gocciolare dalla cavità quando si esegue una corretta incisione.
Continua ad aprire completamente l'articolazione tagliando i tendini che tengono insieme l'articolazione.
Ispezionare la cartilagine per eventuali danni macroscopici.
NOTA: Se la cartilagine articolare non ha un aspetto lucido e liscio o se sono presenti evidenti vesciche, fessure o difetti, scartare la cartilagine.
Utilizzare un bisturi sterile per rimuovere la cartilagine dall'osso subcondrale. Tagliare fino all'osso subcondrale per rimuovere anche la zona profonda della cartilagine (Figura 1). Per evitare che la cartilagine si secchi, gocciolare regolarmente la soluzione di lavaggio della cartilagine sulla cartilagine.
nota: In questo momento, la dimensione delle fette di cartilagine non ha importanza.
Raccogliere le fette di cartilagine in provette da 50 mL contenenti la soluzione per il lavaggio della cartilagine precedentemente preparata (Figura 2A).
Dopo aver raccolto la cartilagine da tutte le aree di interesse, congelare a scatto le fette di cartilagine in azoto liquido per 5 minuti.
Trasferire le fette di cartilagine in provette da 50 ml e liofilizzare immediatamente le fette di cartilagine per 24 ore in un liofilizzatore. Impostare il liofilizzatore a circa 0,090 mbar mentre il condensatore di ghiaccio è a -51 °C (Figura 2B).
Conservare le fette di cartilagine in un luogo asciutto a temperatura ambiente fino a nuovo utilizzo.

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Risultati

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Figura 1: Ginocchio equino dopo la rimozione della cartilagine a tutto spessore. La cartilagine viene rimossa dai condili utilizzando un bisturi fino a raggiungere lo strato di cartilagine calcificata che non può essere tagliato con un bisturi.

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