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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Arrivo e acclimatazione degli animali
- Mettere in quarantena i suinetti di 1-2 giorni per almeno 24 ore dopo l'arrivo.
- Alleva i suinetti in gabbie di acciaio inossidabile pulite e igienizzate (36 pollici x 48 pollici x 36 pollici) su lettiera di trucioli di pioppo tremulo e mangime ad libitum con sostituto del latte di maiale.
- Mantenere la temperatura ambiente a 85 °F per garantire un ambiente termoneutro.
2. Giorno dell'esperimento
- Rimuovere l'alimentazione 2 ore prima dell'esperimento.
- Iniettare nei suinetti un'iniezione intramuscolare di ketamina (10-40 mg/kg)/xilazina (1,5-3,0 mg/kg IM) e trasportarli nello spazio chirurgico attraverso una gabbia di trasporto.
3. Induzione e mantenimento dell'anestesia
- Somministrare un anestetico per inalazione di isoflurano al 4% miscelato in ossigeno dal cono nasale e confermare che l'animale è profondamente anestetizzato valutando l'assenza di riflessi palpebrali e di astinenza.
- Intubare l'animale mettendolo in posizione supina e utilizzare un laringoscopio (lama dritta) per aiutare a guidare il tubo di intubazione (diametro 2,5-2 mm) nella trachea.
- Posizionare l'animale sul ventilatore una volta fissato il tubo di intubazione.
- Assicurarsi che i suinetti ricevano una miscela di isoflurano (0,25%-3% di mantenimento), ossigeno e protossido di azoto.
- Fornire una dose di fentanil (10 μg/kg) e continuare a somministrare una dose ogni 1-2 ore per garantire un'adeguata profondità di analgesia e sedazione e per evitare artefatti da movimento che potrebbero rischiare lo spostamento del tubo endotracheale.
- Stabilire l'accesso endovenoso (IV) nella vena addominale sottocutanea o in qualsiasi altra vena periferica.
- Stabilire la linea arteriosa attraverso l'arteria femorale. Questo può essere fatto in modo non invasivo o eseguendo un taglio.
4. Chirurgia del plesso brachiale
- Posizionare l'animale in posizione supina sul tavolo operatorio dopo un'adeguata anestesia come descritto nella sezione 3, con l'arto superiore in abduzione, esponendo la regione ascellare.
- Usa qualsiasi telo chirurgico per coprire l'animale. Utilizzare tecniche pulite ma non sterili.
- Esporre il complesso del plesso brachiale su entrambi i lati della colonna vertebrale praticando un'incisione sulla linea mediana (utilizzando una lama #10) sulla pelle e sulla fascia sovrastante la trachea, fino al terzo superiore dello sterno, corrispondente ai livelli della colonna vertebrale tra C3 e T3.
- Estrapolare l'incisione utilizzando la pinza e l'emostatico orizzontalmente su ciascun lato dalla tacca soprasternale lungo il bordo della clavicola fino alla parte superiore del braccio, risparmiando le vene cefaliche e basiliche.
- Rilasciare i lembi superiore e inferiore mediante dissezione smussata utilizzando forbici e pinze, consentendo l'accesso rispettivamente alle regioni cervicale e toracica del plesso brachiale.
- Identificare l'asse (C2) e la prima nervatura in corrispondenza del T1. Utilizzando questi punti di riferimento, identificare i tre cervicali inferiori (C6-C8) e il primo forame vertebrale spinale toracico (T1), quindi esaminare attentamente il plesso per individuare le biforcazioni delle divisioni (forma a M) per ottenere l'esposizione.
- Etichettare (usando le anse nervose) le regioni del plesso brachiale sopra queste biforcazioni più vicine alla colonna vertebrale come radice/tronco ed etichettare quelle sotto queste biforcazioni come corde seguite dal nervo, che si trovano più vicino al braccio.