Isolamento dell'aorta suina: una procedura chirurgica per asportare l'aorta toracica da maiali in miniatura per l'analisi a valle

In questo articolo

Abstract

Fonte: Zhao, Y., et al. Isolamento e coltura di cellule endoteliali aortiche primarie da maiali in miniatura J. Vis. Exp. (2019)

In questo video, dimostriamo una procedura per la rimozione chirurgica dell'aorta da maiali in miniatura. Le cellule endoteliali raccolte da queste aorte isolate possono essere ulteriormente coltivate in condizioni in vitro per studiare la coagulazione e le risposte immunitarie.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Chirurgia e preparazione per l'isolamento delle cellule endoteliali aortiche suine

Disinfezione della sala operatoria con luce UV per 1 ora e disinfettante medico 84 liquido (il contenuto di cloro disponibile è del 4,0% - 5,0%, tabella dei materiali) prima di eseguire l'intervento chirurgico.
Dopo che il maiale in miniatura ha ricevuto un'iniezione intramuscolare formata da 15 mg/kg di ketamina, 15 mg/kg di xilazina cloridrato e 0,05 mg/kg di fenacetina cloridrato (volumi: 100 μl/kg, tabella dei materiali) (Figura 1A), confermare lo stato di anestesia dell'animale controllando lo stimolo doloroso suino (ad es. pizzicare un orecchio o scuotere un arto anteriore) e l'indice fisiologico (ad es. pressione sanguigna, frequenza cardiaca e respiratoria).
nota: Un'altra iniezione di mezza dose potrebbe essere somministrata al maiale se mostra i segni del risveglio.
Tagliare l'addome con un bisturi, esporre la vena cava inferiore e di conseguenza iniettare eparina sodica (5.000 U, Tabella dei materiali) nella vena cava inferiore con una siringa da 5 ml.
Cinque minuti dopo, inserire un catetere nell'aorta addominale per il sangue, tagliare la pelle del torace e incidere il diaframma con un bisturi e successivamente tagliare il ventricolo sinistro><. nota: Assicurati che il maiale venga soppresso controllando il polso aortico dopo il sangue e tagliando il cuore.
Asportare le costole con una pinza ossea (Tabella dei materiali) ed esporre il cuore e i polmoni. Trova l'aorta posteriore al cuore e ai polmoni e stringi le due estremità. Lavare l'aorta una volta con tampone di lavaggio pre-raffreddato - 1x soluzione PBS (pH 7,4) con 1% (v/v) di penicillina/streptomicina. (Figura 1B, C).
Taglia l'aorta con le forbici e tieni l'aorta bloccata a ciascuna estremità. Asportare il tessuto in eccesso intorno all'aorta con pinze sterili e forbici. Mettere l'aorta in una provetta da centrifuga da 50 mL, lavare l'aorta con un tampone di lavaggio pre-raffreddato 3 volte (30 mL per lavaggio) e trasferire l'aorta in laboratorio (Figura 1D).

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Risultati

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Figura 1: La procedura chirurgica e l'escissione dell'aorta da un maiale in miniatura. (A) Fotografia di un maiale in miniatura (Bama). (B) L'aorta è esposta dopo laparotomia e toracotomia. (C) L'aorta è bloccata a ciascuna estremità. (D) L'aorta viene posta in una provetta da 50 ml con tampone di lavaggio a freddo.