Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.
1. Preparazione del coniglio per l'intervento chirurgico
- Anestetizzare il coniglio utilizzando 20-40 mg/kg di ketamina e 2 mg/kg di midazolam tramite iniezione sottocutanea. Posizionare il coniglio su isoflurano all'1,5%-3% (in genere al 2%) durante la sedazione iniziale utilizzando una maschera. Somministrare un'iniezione di alfaxalone per mantenere l'anestesia tramite un'iniezione intramuscolare di 3 mg/kg.
- Una volta anestetizzato, rimuovere la maschera e inserire un tubo endotracheale cuffiato nelle vie aeree e collegarlo a un ventilatore. Continuare a somministrare isoflurano all'1,5%-3%.
- Raccogliere il sangue dall'arteria centrale da entrambi gli orecchi per un pannello chimico di base.
- Posizionare un catetere venoso auricolare da 22 G nella vena dell'orecchio laterale per far gocciolare la soluzione di Ringer lattato durante la procedura chirurgica. In alternativa, è possibile utilizzare soluzione fisiologica normale (cloruro di sodio allo 0,9%).
- Utilizzando la vena laterale nell'orecchio opposto, posizionare un catetere nella vena e somministrare alfaxalone a 6 mg/kg/h. Aumentare gradualmente l'alfaxalone a 8 mg/kg/h diminuendo l'isoflurano allo 0,6% durante il periodo di preparazione.
- Per limitare il dolore e il rischio di infezione, somministrare buprenorfina (0,01 mg/kg) ed enrofloxacina (5 mg/kg) utilizzando un'iniezione sottocutanea con un ago da 25 G.
- Taglia i peli sul collo, sull'interno coscia destra e sinistra e sulla schiena usando un tagliacapelli (lama #40). I peli vengono rimossi dalla parte posteriore per mantenere il contatto con il cuscinetto di messa a terra.
- Posizionare un bracciale per la pressione sanguigna su ciascuno degli arti posteriori e misurare la pressione sanguigna iniziale. Posizionare il bracciale appena sotto il ginocchio con la sonda appena sopra il garretto sulla superficie laterale.
- Posizionare il coniglio sul tavolo operatorio sulla schiena e strofinare e drappeggiare i siti dell'intervento. Ciò include il collo per l'accesso all'arteria carotide e l'interno coscia destra per l'accesso all'arteria femorale. Eseguire lo scrub di sterilizzazione alternando scrub di clorexidina al 2% e alcol etilico al 70%. Ripetere l'operazione tre volte, quindi applicare uno spruzzo finale con una soluzione di clorexidina al 2%.
- Posizionare una sfera di acciaio inossidabile da 3 mm che è stata sterilizzata all'interno di una sacca di polietilene a bassa densità sopra la gamba destra (strofinata) vicino alla parte superiore della coscia per fungere da riferimento per le dimensioni durante le misurazioni dell'angiogramma. Posizionare un telo sterile sulla gamba fino al momento dell'intervento. Lasciare la pallina all'interno del sacchetto di plastica sterile durante il primo angiogramma.
2. Angiografia
- Esporre l'arteria carotide comune destra
- Fai un'incisione lunga 4-5 cm appena lateralmente alla trachea usando un bisturi con una lama #15.
- Utilizzare la dissezione smussata per esporre l'arteria carotide e aprire l'incisione utilizzando piccoli divaricatori Weitlaner. Isolare con cura l'arteria carotide dalla vena giugulare e dal nervo vago. In genere, per la dissezione smussata vengono utilizzate una forbice Metzenbaum curva e un emostatico per zanzara curvo. Assicurati di ottenere la completa separazione dell'arteria carotide dal nervo e dalla vena giugulare per fare in modo che le legature leghino solo l'arteria.
- Posizionare una legatura utilizzando una sutura di seta 4-0 alle estremità prossimale e distale dell'arteria esposta. Legare l'estremità distale della carotide con un nodo da chirurgo seguito da quattro nodi quadrati. Sull'estremità prossimale, utilizzare un ligaloop per consentirne il serraggio o l'allentamento secondo necessità. L'uso di un ligaloop posizionato all'estremità prossimale dell'arteria esposta può aiutare a fissare l'introduttore e il catetere.
- Somministrare 500 UI di eparina attraverso la flebo. Utilizzare circa 0,5 ml di lidocaina all'1% applicata lungo la carotide esposta per dilatare il vaso. Un trattamento è solitamente sufficiente, ma può essere ripetuto secondo necessità. Taglia circa a metà dell'arteria carotide usando un bisturi o una forbice per l'iride, quindi posiziona lo strumento di inserimento del filo da 4 pollici nell'arteria.
- Far passare un filo guida di 0,014 pollici x 185 cm attraverso lo strumento di inserimento alla biforcazione aortica in corrispondenza della cresta iliaca nell'aorta discendente. Rimuovere lo strumento di inserimento e inserire un catetere angiografico a spirale 3F sul filo.
- Far avanzare il catetere a spirale in modo che sia 2 cm prossimale alla biforcazione aortica in corrispondenza della cresta iliaca nell'aorta discendente.
- Posizionare la punta del catetere tra la settima vertebra lombare e la prima vertebra sacrale. Testare la posizione del catetere iniettando manualmente 2-4 ml di mezzo di contrasto.
- Somministrare un'iniezione intra-arteriosa di 100 μg di nitroglicerina attraverso il catetere per aumentare la vasodilatazione.
- Somministrare 0,8 ml di lidocaina all'1% al coniglio attraverso il catetere per favorire la vasodilatazione durante l'angiogramma. Collegare il tubo per l'iniettore al catetere e rimuovere eventuali bolle d'aria nella linea. Iniettare 8-9 mL di mezzo di contrasto utilizzando un iniettore angiografico automatizzato attraverso il catetere.
- Registra immagini seriali degli arti posteriori utilizzando l'angiografia.
- Impostare l'iniettore di alimentazione in modo che inietti il contrasto a 3 mL/sec per un totale di 8-9 mL. Esegui l'angiografia a sottrazione digitale a 6 fotogrammi al secondo.
- Selezionare le immagini seriali create e modificare una foto di ciascun angiogramma utilizzando un'impostazione di circa -40% per ridurre al minimo l'aspetto dell'osso e acquisire un'immagine completa della perfusione vascolare con contrasto. Un esempio di angiogramma del flusso vascolare dopo legatura/escissione dell'arteria femorale è mostrato nella Figura 1.
