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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Anestesia e intubazione
- Sedare gli animali (conigli bianchi neozelandesi di tre mesi (maschio o femmina), del peso di ~2,5 kg ciascuno) mediante iniezione intramuscolare (IM) di ketamina (25 mg/kg, 50 mg/mL, 0,5 mL/kg) + xilazina (3 mg/kg, 20 mg/mL, 0,15 mL/kg). Attendi ~20 minuti affinché gli animali dormano
profondamente (atonia muscolare completa).
nota: Questa premedicazione consentirà un processo di intubazione semplice, veloce e indolore. L'analgesia profonda e l'anestesia vengono indotte come descritto al punto 1.1.8.
- Posizionare una cannula endovenosa (IV) nella vena marginale dell'orecchio e tenerla chiusa fino al completamento dell'intubazione.
nota: Questa linea IV servirà a perfondere il fentanil e il propofol rispettivamente per l'analgesia profonda e l'anestesia (vedere il passaggio 1.8).
- Mantenere l'anestesia fornendo il 5% di sevoflurano in ossigeno puro fino all'esecuzione dell'intubazione.
nota: Questo passaggio è necessario solo se l'animale mostra segni di risveglio (movimenti oculari, contrazioni muscolari).
- Anestetizzare localmente la trachea spruzzando il 10% di lidocaina. Metti il coniglio in posizione prona e mantieni la testa in estensione verticale.
- Far scorrere il primo tubo endotracheale di piccolo diametro (2,5 mm) nella trachea del coniglio fino a quando non si sente il flusso d'aria nel tubo. Questo aprirà la laringe e faciliterà l'inserimento del tubo definitivo.
- Inserire una guida (catetere per intubazione) nel tubo per fissare la posizione del tubo nella trachea. Rimuovere il tubo di piccolo diametro e far scorrere il tubo endotracheale definitivo (4,9 mm) sulla guida.
- Rimuovere la guida e gonfiare il palloncino all'estremità del tubo endotracheale per sigillare e bloccare il dispositivo nella trachea. Il tubo rimarrà in posizione, ma può essere fissato utilizzando un laccio legato intorno alla fronte. Ventilare immediatamente (7 ml/kg, frequenza di 40/min) l'animale con il 3% di sevoflurano in ossigeno puro.
- Perfondere continuamente (vena dell'orecchio) fentanil (0,01 mg/mL, 2-4 mL/h) per indurre l'analgesia, 2-4 mg/kg di (2%) propofol (20 mg/mL, 4-8 mL/h) per indurre l'anestesia e 4 mL/kg/h di acetato di Ringer per mantenere le condizioni isovolumetriche.
- Posizionare una sonda di temperatura rettale. Monitora anche la funzione cardiaca, la temperatura e la saturazione di ossigeno durante l'intero processo.
- Controllare la profondità dell'anestesia monitorando la respirazione autonoma; se l'animale mostra segni di respirazione autonoma, erogare un piccolo bolo di propofol e fentanil.