Generazione di un modello di infezione ossea di coniglio: una tecnica per indurre un'infezione cronica iniettando batteri direttamente nel midollo osseo

In questo articolo

Abstract

Fonte: Zhang, Y et al., Trattamento con solfato di calcio caricato con vancomicina e osso autogeno in un modello di infezione ossea di coniglio migliorato. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive la tecnica di induzione chirurgica dell'infezione batterica nel midollo osseo di un coniglio utilizzando la cera ossea per evitare la fuoriuscita di batteri. Questo modello di coniglio può essere utilizzato per studiare il trattamento delle infezioni ossee e la rigenerazione ossea.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Preparazione di modelli di infezione ossea

Allevare conigli bianchi maschi della Nuova Zelanda, di 3 mesi, in gabbie individuali, in condizioni di aria controllata (20 ± 1 °C) e cicli di illuminazione luce-buio di 12 ore/12 ore. Offri una dieta di routine e acqua del rubinetto ogni giorno.
Assicurarsi che al momento dell'intervento chirurgico il coniglio pesi più di 3 kg.
Anestetizzare i conigli mediante iniezione intraperitoneale con pentobarbital sodico (3 mg per 100 g di peso corporeo). Assicurati che i conigli siano completamente anestetizzati dalla mancata risposta a un pizzico di zampa. Fissare i conigli sul tavolo operatorio durante la procedura operativa.
NOTA: Assicurarsi che la durata della procedura di modellazione sia inferiore a 1 ora.
Radere la regione prossimale della tibia utilizzando un rasoio elettrico contro la direzione di crescita dei peli. Disinfettare la pelle applicando una soluzione di iodio povidone.
Contrassegnare l'estremità superiore della tibia e la posizione del foro per l'iniezione con S. aureus (la distanza dall'estremità superiore della tibia è di 1,5 cm) con penna e righello. Assicurarsi che le posizioni dei fori siano al centro del piatto tibiale orizzontalmente (Figura 1A).
Tagliare la pelle della tibia con un bisturi n. 11 e praticare un'incisione di 1 cm nel periostio (Figura 1B, C). Praticare un foro di 2 mm di diametro nella tibia utilizzando un'unità di perforazione ossea elettrica (Figura 1D).
Premere i fori di 2 mm di diametro nel piatto tibiale con un cilindro di cera ossea di 2 mm di diametro e 2 mm di altezza (Figura 1E). Rimuovere la cera ossea di riserva lungo il piano orizzontale del piatto tibiale (Figura 1F). Verificare che il foro da 2 mm sia pieno di cera ossea (Figura 1G).
nota: Assicurarsi che i fori siano pieni di cera ossea controllando il foro con o senza trabocco di sangue.
Cucire il periostio e la pelle con una sutura chirurgica riassorbibile in una sutura verticale a materasso per evitare che l'animale mastichi le suture (Figura 1H).
Iniettare 1 x 10⁸CFU/mL di soluzioni di S. aureus (30 μL per 100 g di peso corporeo) con un iniettore di asepsi da 1 mL (Figura 1I). Assicurarsi che gli aghi penetrino nel cerume osseo e iniettare lentamente la soluzione di S. aureus nel midollo osseo.
Mantenere l'animale in condizioni calde e pulite per evitare la perdita di calore dopo la modellazione. Monitorare la frequenza respiratoria e la frequenza cardiaca. Dopo il risveglio, ospita i conigli in gabbie individuali con libero accesso a cibo e acqua.

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Risultati

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Figura 1. Preparazione chirurgica del modello di infezione ossea.(A) Mostra la posizione di punzonatura sulla tibia. La distanza tra la posizione del foro di perforazione per l'iniezione con S. aureus e l'estremità superiore della tibia è di 1,5 cm. (B) Incisione praticata nella pelle per esporre il periostio. (C) Mostra l'incisione praticat...