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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.
1. Preparazione di modelli di infezione ossea
- Allevare conigli bianchi maschi della Nuova Zelanda, di 3 mesi, in gabbie individuali, in condizioni di aria controllata (20 ± 1 °C) e cicli di illuminazione luce-buio di 12 ore/12 ore. Offri una dieta di routine e acqua del rubinetto ogni giorno.
- Assicurarsi che al momento dell'intervento chirurgico il coniglio pesi più di 3 kg.
- Anestetizzare i conigli mediante iniezione intraperitoneale con pentobarbital sodico (3 mg per 100 g di peso corporeo). Assicurati che i conigli siano completamente anestetizzati dalla mancata risposta a un pizzico di zampa. Fissare i conigli sul tavolo operatorio durante la procedura operativa.
NOTA: Assicurarsi che la durata della procedura di modellazione sia inferiore a 1 ora.
- Radere la regione prossimale della tibia utilizzando un rasoio elettrico contro la direzione di crescita dei peli. Disinfettare la pelle applicando una soluzione di iodio povidone.
- Contrassegnare l'estremità superiore della tibia e la posizione del foro per l'iniezione con S. aureus (la distanza dall'estremità superiore della tibia è di 1,5 cm) con penna e righello. Assicurarsi che le posizioni dei fori siano al centro del piatto tibiale orizzontalmente (Figura 1A).
- Tagliare la pelle della tibia con un bisturi n. 11 e praticare un'incisione di 1 cm nel periostio (Figura 1B, C). Praticare un foro di 2 mm di diametro nella tibia utilizzando un'unità di perforazione ossea elettrica (Figura 1D).
- Premere i fori di 2 mm di diametro nel piatto tibiale con un cilindro di cera ossea di 2 mm di diametro e 2 mm di altezza (Figura 1E). Rimuovere la cera ossea di riserva lungo il piano orizzontale del piatto tibiale (Figura 1F). Verificare che il foro da 2 mm sia pieno di cera ossea (Figura 1G).
nota: Assicurarsi che i fori siano pieni di cera ossea controllando il foro con o senza trabocco di sangue.
- Cucire il periostio e la pelle con una sutura chirurgica riassorbibile in una sutura verticale a materasso per evitare che l'animale mastichi le suture (Figura 1H).
- Iniettare 1 x 108 CFU/mL di soluzioni di S. aureus (30 μL per 100 g di peso corporeo) con un iniettore di asepsi da 1 mL (Figura 1I). Assicurarsi che gli aghi penetrino nel cerume osseo e iniettare lentamente la soluzione di S. aureus nel midollo osseo.
- Mantenere l'animale in condizioni calde e pulite per evitare la perdita di calore dopo la modellazione. Monitorare la frequenza respiratoria e la frequenza cardiaca. Dopo il risveglio, ospita i conigli in gabbie individuali con libero accesso a cibo e acqua.
