Articolo metodologico

Vitrificazione di embrioni di coniglio con paglia criogenica: una tecnica di raffreddamento ultrarapido per conservare embrioni di coniglio per la conservazione a lungo termine

8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Garcia-Dominguez, X. et al. Trasferimento embrionale minimamente invasivo e vitrificazione embrionale allo stadio embrionale ottimale nel modello di coniglio. J. Vis. Exp. (2019)

In questo video, descriviamo la procedura per la vitrificazione degli embrioni di coniglio raccolti allo stadio di sviluppo desiderato utilizzando glicole etilenico e dimetilsolfossido come crioprotettori e paglia criogenica come sistema di trasporto. Gli embrioni vitrificati hanno un alto tasso di sopravvivenza e possono essere conservati per un periodo prolungato fino all'uso.

Protocollo

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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Vitrificazione di embrioni

  1. Eseguire tutte le manipolazioni a temperatura ambiente (circa 22 °C) per ridurre la tossicità della soluzione di vetrificazione a temperature più calde.
    nota: In questo protocollo, gli embrioni possono essere spostati utilizzando una pipetta automatica da 0,1-2 μl, ma possono essere adatti altri dispositivi simili per spostare gli embrioni trascinando il volume minimo.
  2. Vitri....

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Risultati

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Figura 1: Schematizzazione della paglia correttamente caricata. A) Il midollo osseo si riferisce ai mezzi di manipolazione degli embrioni impiegati durante la vitrificazione. Gli embrioni devono essere caricati in soluzione di vitrificazione. B) Aspetto macroscopico della paillette caricata con un dettaglio ingrandito della posizione dell'embrione. Questo dispositivo di grande volum.......

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Albumina sierica bovina (BSA)VWR332
DimetilsolfossidoSigma AldrichW387509
Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS)Sigma AldrichD5773Senza cloruro di calcio.
Glicole etilenicoSigma AldrichCodice 102466-M
azoto liquidoAria LiquidaP1505XXX
Cannuccia di plastica 0,25 mLIMV - tecnologieCodice 6431
StereomicroscopioLeicaMZ16FCi sono opzioni più economiche come Leica MZ8 o Nikon SMZ-10 o SMZ-2B, solo per citarne alcune.
Tappo di pagliaIMV - tecnologieCodice 6431

Ristampe e permessi

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Portacannicce criogenicoEtilene glicole DMSOCrioprotettori per embrioniImmersione in azoto liquidoConservazione a lungo termine di embrioniTecnica del microdispensatoreProtocollo della soluzione di vitrificazioneProcedura di trasferimento embrionale

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